重組畢赤酵母產(chǎn)Lunasin發(fā)酵工藝及Lunasin生物活性研究.pdf

1、Lunasin是一個(gè)最初從大豆中分離，含有43個(gè)氨基酸，分子量為5 kDa，具有抗氧化、抗炎癥、抗癌癥、降血脂功能的多肽。
　　本文對(duì)一株畢赤酵母工程菌高產(chǎn)Lunasin的發(fā)酵工藝和膜分離純化條件，以及降血脂活性進(jìn)行了研究。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)菌株生長(zhǎng)特性研究。以O(shè)D600為指標(biāo)，確定了該畢赤酵母在YPG培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線，確定其一級(jí)種子液和二級(jí)種子液培養(yǎng)最適時(shí)間分別為28 h和20h。以蛋白表達(dá)量為指標(biāo)確定山梨醇

2、添加量為40 g/L，甘露醇添加量為20g/L。
　　(2)高密度發(fā)酵工藝優(yōu)化。比較了溶氧反饋補(bǔ)料和指數(shù)-恒速補(bǔ)料兩種補(bǔ)料方式，溶氧反饋補(bǔ)料Lunasin最高表達(dá)量為0.889 g/L，指數(shù)-恒速補(bǔ)料最高表達(dá)量為1.805 g/L;誘導(dǎo)溫度為24℃條件下表達(dá)量最高，為2.57 g/L;比較了誘導(dǎo)期單一碳源與雙碳源（甲醇-山梨醇，甲醇-甘露醇）補(bǔ)料策略，發(fā)現(xiàn)甲醇-甘露醇混合補(bǔ)料更有利于提高Lunasin的表達(dá)，最高表達(dá)量達(dá)到3.02

3、 g/L;甲醇-復(fù)合氮源混合補(bǔ)料最高表達(dá)量達(dá)到3.26 g/L，是最初Lunasin表達(dá)量的3.67倍。
　　(3)膜分離工藝優(yōu)化。研究了Vivaflow200超濾膜包的兩級(jí)膜過(guò)濾來(lái)提純Lunasin并提高回收率的條件。結(jié)果表明一級(jí)膜過(guò)濾最優(yōu)條件為進(jìn)料壓力0.2MPa，pH8.5，發(fā)酵液溫度40℃，添加0.6倍原體積超純水稀釋，回收率達(dá)到0.9412;二級(jí)膜過(guò)濾最優(yōu)條件為進(jìn)料壓力0.25 MPa，pH5.5，發(fā)酵液溫度30℃，稀釋

4、倍數(shù)為625倍，回收率為0.7895。兩級(jí)超濾分離后綜合回收率為0.7396。
　　(4) Lunasin降血脂活性研究。通過(guò)高脂飼料飼喂SD大鼠構(gòu)建高血脂模型，探討Lunasin對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性高血脂癥的降血脂作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Lunasin能有效降低高血脂癥大鼠血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，總膽固醇(TC)，低密度脂蛋白(LDL)，差異均達(dá)到顯著水平(p＜0.05)，說(shuō)明Lunasin能夠降低血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)膽固醇(TC