GATA-6過表達和干擾載體的構建及其對鵝顆粒細胞類固醇合成及相關基因的調控研究.pdf

1、GATA家族是能與靶基因核酸的共同序列（A/T）GATA(A/G)相結合的轉錄因子，其核心成員GATA-4和GATA-6主要表達于動物卵巢顆粒細胞和膜細胞中，GATA-4和GATA-6被證實在人、小鼠以及豬的卵巢中均共同參與調控類固醇激素的合成過程。目前對GATA-4調控卵巢顆粒細胞類固醇激素合成的機理已經進行了大量的研究，但GATA-6在鵝以及其他物種卵巢中的功能研究卻還沒有報道。因此，本研究以天府肉鵝母系為實驗材料，首先構建鵝GAT

2、A-6干擾載體和過表達載體;其次通過干擾和過表達GATA-6基因，分析其對顆粒細胞類固醇合成及相關基因的調控作用;最后通過共轉染GATA-4和GATA-6過表達載體，探討兩者在顆粒細胞中的作用差異及可能的相互作用關系。主要研究結果如下:
　　(1)通過RT-PCR、克隆測序以及序列拼接獲得天府肉鵝GATA-6基因完整編碼區(qū)序列1173bp，預測其共編碼390個氨基酸，序列提交至NCBI數(shù)據(jù)庫，其登陸號為:KP723851。

3、　　(2) CCK結果表明:過表達GATA-6基因后，鵝卵巢顆粒細胞增殖率上升;而干擾.GATA-6基因表達后，顆粒細胞增殖率下降;由此表明GATA-6能夠正向調控顆粒細胞增殖。
　　(3)與空白組及空載組相比，干擾GATA-6基因表達后，膽固醇和孕酮的分泌量顯著增加(p＜0.05)，而其下游靶基因3β-HSD、Cyp17、P450scc、17β-HSD表達量顯著降低(p＜0.05)，Cyp19、StAR顯著上升(p＜0.05)，

4、而FSHR無明顯變化(p＞0.05)。故表明3β-HSD、Cyp19、 Cyp17、P450scc、17β-HSD、StAR是GA TA-6在卵泡發(fā)育過程中參與調控轉錄的下游靶基因，并通過調控相關靶基因轉錄間接調節(jié)類固醇激素的合成。
　　(4)與空白組及空載組相比，過表達GATA-6基因后，孕酮分泌量增加(p＞0.05)，膽固醇分泌量降低(p＞0.05)，睪酮分泌量極顯著減少(p＜0.01);而其下游靶基因3β-HSD和Cyp19

5、以及FSHR的表達量極顯著下降(p＜0.01)，17β-HSD顯著下降(p＜0.05)，Cyp17和StAR的表達量極顯著上升(p＜0.01)，P450scc的表達量雖然呈上升趨勢但是差異不顯著(p＞0.05)。此外，GATA-4基因表達量無顯著性的變化，所有空白組和對照組之間沒有顯著的變化(p＞0.05)。比較干擾和過表達實驗的結果，表明GATA-6對于調控下游靶基因存在差異性的調控模式;而轉錄因子GATA-6對轉錄因子GATA-4的

6、表達量的影響沒有差異性的影響。
　　(5)與空白組以及對照組相比，共轉染GATA-4和GATA-6真核表達載體后，膽固醇的分泌量顯著增加(p＜0.05)，孕酮分泌量增加但差異不明顯(p＞0.05)，睪酮分泌量顯著減少(p＜0.05)。而下游靶基因3β-HSD、Cyp19以及FSHR的表達量顯著升高(p＜0.05)，17β-HSD雖然表達量上升但差異不顯著(p＞0.05)，Cyp17和P450scc表達量極顯著降低(p＜0.01)，