無(wú)鎳鈷鉻合金的體外細(xì)胞相容性研究.pdf

1、目的:
　　通過(guò)細(xì)胞毒性檢測(cè)及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)新型無(wú)鎳鈷鉻合金對(duì)L929成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，為其在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用提供生物學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　將新型無(wú)鎳鈷鉻合金及L605鈷鉻合金依次用400目、600目、1000目、2000目、3000目砂紙打磨拋光。本實(shí)驗(yàn)分組情況為:陰性對(duì)照組、無(wú)鎳鈷鉻合金組、L605鈷鉻合金組及純鉛組（陽(yáng)性對(duì)照組）。按國(guó)標(biāo)ISO10993-5樣品浸提液制備標(biāo)準(zhǔn)制備無(wú)鎳鈷鉻合金、L6

2、05鈷鉻合金及純鉛浸提液。采用RPMI1640培養(yǎng)基對(duì)L929成纖維細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后，分別加入三種浸提液作用于L929細(xì)胞24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)。通過(guò)倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)并分別于三個(gè)時(shí)間點(diǎn)拍照;采用WST-1細(xì)胞毒性檢測(cè)法評(píng)價(jià)三種材料對(duì)L929成纖維細(xì)胞增殖的影響，通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果（OD值）計(jì)算細(xì)胞相對(duì)增殖率并判斷細(xì)胞毒性等級(jí);采用AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法通過(guò)流式細(xì)胞儀評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)材料對(duì)L92

3、9細(xì)胞凋亡情況的影響。
　　結(jié)果:
　　細(xì)胞形態(tài)觀察結(jié)果:在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，陰性對(duì)照組、無(wú)鎳鈷鉻合金組、L605鈷鉻合金組浸提液作用下的L929成纖維細(xì)胞均表現(xiàn)出良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。細(xì)胞走向?yàn)樾郎u狀或放射火焰狀，細(xì)胞輪廓呈清晰的長(zhǎng)梭形或多角形，細(xì)胞貼壁良好、胞膜完整、胞質(zhì)豐富，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞數(shù)量逐漸增多。陽(yáng)性對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，細(xì)胞體積縮小、胞核固縮、胞質(zhì)濃縮深染，鏡下可見(jiàn)較多的圓形死細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)

4、基上。
　　WST-1細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果:將各組材料浸提液作用下的細(xì)胞存活率進(jìn)行比較:陰性對(duì)照組＞無(wú)鎳鈷鉻合金組＞ L605鈷鉻合金組＞陽(yáng)性對(duì)照組，無(wú)鎳鈷鉻合金組分別與陰性對(duì)照組、L605鈷鉻合金組、陽(yáng)性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。依據(jù)美國(guó)藥典(United States Pharmacopeia)進(jìn)行細(xì)胞毒性等級(jí)評(píng)價(jià)，結(jié)果如下:陰性對(duì)照組及無(wú)鎳鈷鉻合金組在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)均無(wú)細(xì)胞毒性。L605鈷鉻合金

5、組在浸提液作用24小時(shí)、48小時(shí)后細(xì)胞毒性均為1級(jí)，表現(xiàn)為無(wú)細(xì)胞毒性;72小時(shí)后顯示出輕微的細(xì)胞毒性，細(xì)胞毒性為2級(jí)。陽(yáng)性對(duì)照組細(xì)胞在鉛浸提液作用24小時(shí)后，細(xì)胞毒性為2級(jí);48小時(shí)后細(xì)胞毒性為3級(jí)呈中等程度細(xì)胞毒性，72小時(shí)細(xì)胞毒性為4級(jí)，表現(xiàn)為明顯的細(xì)胞毒性。
　　AnnexinⅤ-FITC/PI細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果:各組合金浸提液作用下的L929細(xì)胞早期凋亡率按陰性對(duì)照組、無(wú)鎳鈷鉻合金組、L605鈷鉻合金組的順序依次遞增，其數(shù)值