新型醫(yī)用無(wú)鎳不銹鋼(BIOSSN4)的生物相容性評(píng)價(jià)—體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn).pdf

1、目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)用新型醫(yī)用無(wú)鎳不銹鋼BIOSSN4浸提液培養(yǎng)小鼠L929成纖維細(xì)胞，通過(guò)MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力并計(jì)算相對(duì)增殖率，從而對(duì)這種合金的生物相容性進(jìn)初步檢測(cè)，并與傳統(tǒng)使用的醫(yī)用316L不銹鋼，金合金的生物相容性進(jìn)行比較和評(píng)價(jià)，為該材料的臨床應(yīng)用提供生物學(xué)依據(jù)。
　　 方法：
　　 一、實(shí)驗(yàn)材料
　　 將實(shí)驗(yàn)試樣分為：A組：BIOSSN4不銹鋼，B組：316L不銹鋼，C組：金合金，D組：鉛。將

2、A-D組材料分別制成半徑5mm、厚lmm的圓形蠟片，根據(jù)不同合金的要求鑄造形成圓形金屬片，打磨拋光后超聲清洗15min；去離子水沖洗數(shù)遍后置于玻璃小瓶中，將金屬片于121℃高壓滅菌后待用。無(wú)菌下，將A-D組試樣分別在超凈工作臺(tái)中，按浸液與試樣表面積之比為0.55ml/cm2的比例加入RPMI1640培養(yǎng)液，置于37℃，95％濕度，5％CO2培養(yǎng)箱中浸提72小時(shí)，即得到材料浸提液。
　　 二、實(shí)驗(yàn)方法
　　 取96孔培養(yǎng)板

3、，每孔加入細(xì)胞懸液100ul。在1-4組孔中分別加入A-D組材料浸提液100 μl，在第5組孔內(nèi)加入即RPMI1640培養(yǎng)液1001μl后，放入培養(yǎng)中培養(yǎng)。分別于培養(yǎng)后的1-3天各取一塊培養(yǎng)板，在倒置相差顯微鏡下觀察活胞的形態(tài)。在每孔中加入5mg/ml的MTT 液20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后取出。吸培養(yǎng)液，在每孔中加入DMS0150μl，用自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度值。將各組的吸度值作單因素方差分析和均數(shù)間兩兩比較的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)算各組的細(xì)胞相

4、對(duì)增殖率（RGR）并作細(xì)胞毒性級(jí)評(píng)定。
　　 結(jié)果：
　　 一、細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察
　　 培養(yǎng)24小時(shí)，陽(yáng)性對(duì)照組中貼壁生長(zhǎng)的細(xì)呈梭形或多角形，懸浮的細(xì)胞呈圓形或不規(guī)則形，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡及顆粒狀物。其余各組的細(xì)胞幾乎全部貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)正常，胞質(zhì)均勻。培養(yǎng)72小時(shí)，陽(yáng)性對(duì)照組中的細(xì)胞大部分脫落，胞質(zhì)，胞核濃縮，甚至可見(jiàn)許多質(zhì)膜崩解，核破裂的死亡細(xì)胞。其余各組細(xì)胞大部分繼續(xù)貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞密度增加，可見(jiàn)散的懸浮的退化細(xì)胞

5、及個(gè)別的死亡細(xì)胞。
　　 二、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果
　　 金屬材料組及陰性對(duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組之間的光度值的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。三種金屬材料組的細(xì)胞相對(duì)增殖率由大到小的順序依次為：金合金，BIOSSN4無(wú)鎳不銹鋼，316L不銹鋼。BIOSSN4無(wú)鎳不銹鋼，金合金對(duì)細(xì)胞均有極輕微的毒性，316L不銹鋼對(duì)細(xì)胞表現(xiàn)出1級(jí)細(xì)胞毒性，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示：三種金屬材料組與陰性對(duì)照組的吸光度值之間的差均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)