亞油酸異構(gòu)酶高產(chǎn)菌株選育及其酶學(xué)特性研究.pdf

1、共軛亞油酸（ConjugatedLinoleicAcid，CLA）具有增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抑制癌癥、減肥、抗氧化等生理功能。目前，CLA主要由化學(xué)合成法和生物合成法得到，而生物合成法因其反應(yīng)條件溫和，產(chǎn)物成分較單一，在食品醫(yī)藥領(lǐng)域展現(xiàn)出了良好的應(yīng)用潛力。
　　本文以黃瓜泡菜、蘿卜泡菜、豇豆泡菜等為原材料，結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)方法，從中篩選出具有轉(zhuǎn)化亞油酸為共軛亞油酸能力相對(duì)較高的菌株，并對(duì)其進(jìn)行菌種鑒定。以CLA轉(zhuǎn)化率為考

2、察指標(biāo)，優(yōu)化了菌株產(chǎn)共軛亞油酸的發(fā)酵條件，并對(duì)亞油酸異構(gòu)酶的分離純化及其酶學(xué)特性進(jìn)行了研究。主要結(jié)論如下：
　　（1）從泡菜環(huán)境中篩選出具有較高CLA轉(zhuǎn)化能力的的菌株——PC-3菌株，其能轉(zhuǎn)化LA為具有生物活性的c9,t11-CLA和t10,c12-CLA。結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)方法，經(jīng)形態(tài)學(xué)、生理生化試驗(yàn)及16SrDNA序列分析，鑒定PC-3菌株為植物乳桿菌亞種PC-3菌株，其16SrDNA基因序列長(zhǎng)度為1460bp，序列提交到Ge

3、nBank登記，登陸號(hào)為JX270774.1。
　?。?）采用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，結(jié)果表明植物乳桿菌亞種PC-3菌株發(fā)酵的主要影響因素是培養(yǎng)時(shí)間、接種量和LA添加量，其較佳的發(fā)酵條件：誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間為43.0h、接種量為3.0%(v/v)、LA添加量為1.30‰(v/v)、乳糖:硫酸銨=3:2、乳化劑Tween-80添加量為2.0‰(w/v)。
　?。?）采用超聲波與酶法相結(jié)合的細(xì)胞破碎方法。

4、超聲波破碎次數(shù)為80次（超聲3s，間歇4s，功率400w），溶菌酶添加濃度為0.8%，菌懸液濃度為15%g/mL，碎菌液體積為4mL，NaCl濃度為0.1mol/L。硫酸銨分段沉淀的飽和度范圍為20%~80%，超濾后進(jìn)行葡聚糖凝膠G-100過(guò)濾層析，提高植物乳桿菌亞種PC-3菌株亞油酸異構(gòu)酶的純化倍數(shù)可達(dá)4.60。經(jīng)不連續(xù)SDS-PAGE電泳，測(cè)得該酶的相對(duì)分子量為42.88kDa。該酶最適反應(yīng)溫度為35℃，最適反應(yīng)pH值為4.0，其熱