吉非羅齊參與細胞脂代謝調控的分子作用機制研究.pdf

1、血脂是血漿中的中性脂肪(甘油三酯和膽固醇)和類脂(磷脂、脂、固醇、類固醇)的總稱，是細胞基礎代謝的必需物質。近來，由于飲食生活不當或者缺乏鍛煉造成的肥胖患者越來越多，由此引發(fā)的高血脂癥受到廣泛關注。常用的降脂藥物主要有膽酸結合樹脂、他汀類、煙酸類和苯氧芳酸衍生物。其中吉非羅齊屬于苯氧芳酸類，是一種較新的血脂調節(jié)劑，其作用機理主要是抑制極低密度脂蛋白(VLDL)在肝臟的合成，增加脂蛋白脂酶的活性，促進VLDL的分解代謝，從而降低TG和低密

2、度脂蛋白的形成。但其在細胞內對脂代謝的調控機制尚不清楚，因此我們利用模式生物酵母探究吉非羅齊在細胞內對脂類代謝的調控機制。
　　吉非羅齊處理野生型釀酒酵母by4741a后，與我們預測相反，TAG含量和脂滴數(shù)目均有顯著增加。然后我們逐一檢測細胞中性脂代謝通路中關鍵基因缺失（pah1△、tgl3△、tgl4△、tgl3△tgl4△、lro1△、are1△、are2△、dga1△、dgk1△等）后吉非羅齊的升脂效應，對比發(fā)現(xiàn)，DGK1敲

3、除之后細胞內TAG和脂滴數(shù)目不再受藥物的影響。初步確定DGK1p可能是吉非羅齊細胞內靶向調控的酶。
　　由于DGK1p調控DAG生成PA，因此進一步檢測吉非羅齊對細胞PA含量的影響，結果表明其可以抑制DGK1p的活性。RT-PCR檢測吉非羅齊處理顯著下調DGK1的表達，并且下調依賴于轉錄因子TUP1和CYC8；隨后，實驗數(shù)據(jù)表明吉非羅齊通過 TUP1p-CYC8p與DGK1啟動子-TATA-高度保守元件（-400bp—-200bp

4、）結合起調控作用；同時，發(fā)現(xiàn)藥物也可以通過上調具有轉錄抑制作用的轉錄因子TUP1、CYC8基因的表達，增強對DGK1基因啟動子的抑制作用，從而降低DGK1基因的表達量，進而升高細胞內TAG的含量。最后，我們對pah1△背景下酵母必需基因超表達文庫進行吉非羅齊耐受篩選鑒定，發(fā)現(xiàn)過表達NAF1、KIN28、RPL15A等能明顯提高細胞的藥物抗性，其中大部分與蛋白質的轉錄與翻譯息息相關，為進一步研究吉非羅齊通過TUP1、CYC8調控DGK1對