紫外誘變及電融合法構(gòu)建赤蘚糖醇高產(chǎn)菌株的研究.pdf

1、赤蘚糖醇(Erythrito1)是一種天然存在的四碳糖醇，化學(xué)名1，2，3，4-丁四醇，分子式C4H1004，分子量122.12，，熔點(diǎn)126℃，沸點(diǎn)329～331℃，外觀為白色粉狀結(jié)晶，粉碎性好，溶于水會(huì)吸收較多能量，溶解熱為-97.4J/g，使用時(shí)有一種涼爽的口感特征。 赤蘚糖醇，在自然界中的分布十分廣泛，海藻、磨菇類以及甜瓜、葡萄、桃等水果中均含有赤蘚糖醇，由于細(xì)菌、真菌和酵母也能產(chǎn)生赤蘚糖醇，所以赤蘚糖醇也存在于果酒、啤

2、酒、醬油等發(fā)酵食品中。赤蘚糖醇是一種適度的甜味增量劑，甜度為蔗糖的60％～70％，不被突變鏈球菌利用，抗齲齒，不參加糖代謝和血糖變化，適宜糖尿病、肥胖病和心腦血管病人食用。具有酷似蔗糖的口味而發(fā)熱量卻接近零，生理耐受量高，可作為低熱量功能性保健食品配料，應(yīng)用前景十分廣泛。 本研究旨在運(yùn)用紫外誘變方法從實(shí)驗(yàn)室篩選到赤蘚糖醇產(chǎn)生菌中選育優(yōu)良菌株，進(jìn)而采用原生質(zhì)體電融合技術(shù)將同種不同株的較高產(chǎn)赤蘚糖醇的高滲假絲酵母菌株進(jìn)行融合，得到赤

3、蘚糖醇高產(chǎn)工程菌，并對(duì)該菌株的生長(zhǎng)條件進(jìn)行深入研究。 在菌種活化采集和篩選的同時(shí)，對(duì)赤蘚糖醇的檢測(cè)方法進(jìn)行了比較，摸索出了一種利用特殊顯色劑的薄層層析檢測(cè)方法，即通過標(biāo)準(zhǔn)樣品的梯度定量點(diǎn)樣，制作出一張標(biāo)準(zhǔn)薄層板，在實(shí)驗(yàn)中樣品只需將薄層板層析結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)板對(duì)照，就可以對(duì)樣品中的赤蘚糖醇進(jìn)行初步定性、定量分析。這樣極大方便了在誘變菌株中高產(chǎn)赤蘚糖醇菌株的檢出及細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)時(shí)在大量的融合菌株中目的融合子的檢出。 對(duì)紫外誘變高產(chǎn)赤

4、蘚糖醇菌進(jìn)行了正交實(shí)驗(yàn)，確定紫外誘變何光復(fù)活交替進(jìn)行的誘變育種條件；將原生質(zhì)體電融合獲得的高產(chǎn)菌株從溫度、培養(yǎng)時(shí)間和pH等生長(zhǎng)條件進(jìn)行了研究，最后確立高產(chǎn)赤蘚糖醇菌株RH-UV-L4-F9培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度30℃，培養(yǎng)時(shí)間6d，初始培養(yǎng)基pH為5～6，葡萄糖濃度為30％，氮源為0.5％酵母膏與0.1％脲。經(jīng)上述條件培養(yǎng)后發(fā)酵液中赤蘚糖醇含量為120.6mg/ml，比出發(fā)菌株提高了3.61倍。 對(duì)在實(shí)驗(yàn)過程中影響原生質(zhì)體形成率、再