斜帶石斑魚(yú)抗菌肽-2的基因克隆、活性及其組織內(nèi)表達(dá).pdf

1、近年來(lái)，在養(yǎng)殖業(yè)暴發(fā)的大規(guī)模的感染性疾病導(dǎo)致了海水魚(yú)類的大量死亡，而抗菌肽被證明是魚(yú)類非特異性免疫的一種主要機(jī)制而可能用于對(duì)抗感染性疾病。抗菌肽(antimicrobialpeptides)是具有抗菌活性的肽類的總稱。目前發(fā)現(xiàn)抗菌肽或類似抗菌肽的小分子肽類廣泛存在于昆蟲(chóng)、水產(chǎn)動(dòng)物、兩棲類、鳥(niǎo)類、哺乳動(dòng)物、植物和微生物中。由cDNA編碼的抗菌肽-2是從斜帶石斑魚(yú)(orange-spottedgrouper,Epinepheluscoioi

2、des)cDNA文庫(kù)中分離出來(lái)。這個(gè)抗菌肽由52個(gè)氨基酸殘基組成，其中包括了信號(hào)肽(22個(gè)氨基酸殘基)和成熟肽(30個(gè)氨基酸殘基)?！　”緦?shí)驗(yàn)結(jié)果分為以下三部分：首先，運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增抗菌肽-2(epinecidin-2)的全基因，并與其cDNA序列相比較，從而得到具有3個(gè)內(nèi)含子和4個(gè)外顯子的基因結(jié)構(gòu)。同時(shí)運(yùn)用反向PCR技術(shù)擴(kuò)增得到其上游調(diào)控序列，序列包括了TATA區(qū)，CAAT區(qū)等調(diào)控序列；接著，運(yùn)用化學(xué)固相合成的方法合成高純度的成

3、熟抗菌肽-2，并用稀釋法對(duì)16種革蘭氏陰性和陽(yáng)性菌進(jìn)行了抑菌實(shí)驗(yàn)，這些細(xì)菌大部分都是水生病原菌，其中抗菌肽-2對(duì)溫和氣單胞菌、少動(dòng)假單胞菌、施氏假單胞菌以及摩根爾摩根菌表現(xiàn)了較強(qiáng)的抑菌效果(最低殺死濃度(MBC)＜8μM)，對(duì)其他的菌種也有一定的抑菌效果；最后，運(yùn)用半定量RT-PCR和原位雜交方法，檢測(cè)抗菌肽-2在斜帶石斑魚(yú)各組織(包括心，脾，腦，腎，肝，皮膚，鰓和腸等)的表達(dá)分布，并初步研究注射免疫調(diào)節(jié)劑與抗菌肽表達(dá)量的時(shí)間依賴關(guān)系和