小膠質細胞在腦衰老進程中相關免疫功能改變的研究.pdf

1、目的：⑴檢測衰老過程中大腦小膠質細胞數(shù)目和形態(tài)的改變；⑵檢測衰老過程中大腦小膠質細胞分泌IL-6、IL-1β水平的改變；⑶檢測衰老過程中大腦小膠質細胞吞噬Aβ42能力的改變。 方法：①以McCarthy的方法為基礎，并加以改進，采用振搖結合貼壁分離法純化小膠質細胞；CD11b免疫細胞化學染色對純化的小膠質細胞純度進行鑒定；相差顯微鏡下進行細胞形態(tài)觀察和細胞計數(shù)；CCK-8比色法檢測純化的小膠質細胞在不同時間點的活力和增殖。②將小

2、膠質細胞以1×105/well種入24孔板，各年齡組小膠質細胞均設對照組和3個實驗組，對照組為正常衰老組，不加任何干預；實驗組1加入25ng/mlLPS刺激，實驗組2和實驗組3分別加入250nM和500nM濃度的Aβ42，孵育24h。24h后取上清液用ELASA法測定IL-1β和IL-6水平。③用FAM標記聚集態(tài)的Aβ42，并孵育小膠質細胞；24h后，吸去介質液，并用加有胎盤藍的PBS平衡鹽溶液清洗小膠質細胞，以消除殘留在細胞外和細胞膜

3、上的熒光蛋白；用多功能酶標儀分析測定細胞內(nèi)的熒光強度。 結果：⑴純化分離的不同年齡組小膠質細胞進行CD11b抗體染色陽性細胞≥95％，培養(yǎng)過程中未出現(xiàn)明顯的增殖。⑵Aβ42呈劑量依賴性誘導小膠質細胞分泌IL-1β和IL-6增加，差異有顯著性意義（P＜0.05）；250nM Aβ42與LPS組IL-6水平無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；隨大鼠年齡的增大，小膠質細胞分泌IL-1β和IL-6水平呈梯度增高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05

4、）。⑶結果顯示，衰老過程中小膠質細胞熒光強度呈梯度降低，對三個年齡組小膠質細胞內(nèi)的熒光強度進行方差分析和兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結論：①以McCarthy的方法為基礎，并進行適當?shù)母牧?，成功培養(yǎng)出不同年齡組SD大鼠源性的小膠質細胞，為下一步研究打下了基礎；衰老過程中，SD大鼠大腦皮層內(nèi)的小膠質細胞數(shù)量無明顯改變；老年組SD大鼠源性的小膠質細胞的活力明顯低于青年組和中年組。②Aβ42呈劑量依賴性誘導小膠質細