脂肪干細胞在構建組織工程膀胱中的應用.pdf

1、目的：探討脂肪干細胞（Adipose-derived stem cells，ADSCs）向膀胱平滑肌細胞（Smooth muscle cells，SMCs）和尿路上皮細胞（Urothelial epithelium cells，UCs）誘導分化的能力，同時初步探索制備適合工程膀胱細胞生長的支架材料。
　　方法：采用膠原酶Ⅰ消化大鼠腹股溝處脂肪，提取ADSCs，培養(yǎng)3-5代，開始誘導分化。實驗組A：ADSCs+SMCs培養(yǎng)基+BB型

2、血小板源性生長因子（PDGF-BB）+轉化生長因子-β1（TGF-β1）；實驗組B：ADSCs+UCs培養(yǎng)基+表皮生長因子（EGF）；對照組為ADSCs。通過免疫熒光、Western Blot和逆轉錄多聚酶鏈式（RT-PCR）評價脂肪干細胞的誘導水平。另外取生物材料:聚乳酸羥基乙酸（PLGA）、殼聚糖和海藻酸鈉通過雙乳法制備 PLGA-殼聚糖（PLGA-CS）、PLGA-海藻酸鈉聚合物。
　　結果：大鼠脂肪干細胞原代接種24h后，

3、初呈短梭形或多角形，48h后分裂增殖速度加快，體積變大。融合至80％-90%，傳代比為1:3，取P3 ADSCs，進行誘導分化。4周后，A組表達平滑肌細胞標志物（Desmin、Myosin），B組表達尿路上皮細胞標志物（UP-Ia、CK-13）。雙乳法制備的PLGA-CS聚合物場發(fā)射掃描電鏡觀察納米粒的顆粒直徑為（272.93±5.22）nm，電勢為（29.37±0.92）mV；PLGA-海藻酸鈉納米粒的顆粒直徑為（190.27±3.5