膀胱脫細胞基質負載兔脂肪間充質干細胞構建組織工程膀胱的實驗研究.pdf

1、第一部分：種子細胞—兔脂肪間充質干細胞的培養(yǎng)和鑒定
　　 [目的]本部分從新西蘭兔腹股溝脂肪組織中分離得到脂肪間充質干細胞(ADSCs)，并對其進行體外培養(yǎng)、擴增及鑒定，探討用ADSCs構建組織工程膀胱的可行性。同時也探討了脂肪間充質干細胞分化成尿路上皮細胞的可行性。
　　 [方法]用膠原酶消化法從兔的腹股溝脂肪中分離得到脂肪間充質干細胞，觀察其生物學行為，成脂、成骨誘導后，用油紅O及von Kossa、茜素紅染色定性等

2、手段進行鑒定。用脂肪間充質干細胞與尿路上皮直接共培養(yǎng)的方法誘導脂肪間充質干細胞分化成尿路上皮細胞。
　　 [結果]用膠原酶消化法能分離得到脂肪間充質干細胞，光鏡檢查符合脂肪間充質干細胞形態(tài)，生長曲線測定提示細胞生長狀況良好、具有較強增殖能力。油紅O及von Kossa、茜素紅染色均陽性。脂肪間充質干細胞經誘導后有尿路上皮樣細胞特異性標記。
　　 [結論]用膠原酶消化法從兔的腹股溝脂肪中分離得到的種子細胞，經鑒定證實為脂肪

3、間充質干細胞。該細胞來源廣泛、取材容易，創(chuàng)傷小，獲取的細胞數(shù)量多，培養(yǎng)條件要求低，擴增能力強，是比較理想的組織工程種子細胞。同時也證明脂肪間充質干細胞有分化成尿路上皮細胞的潛能。
　　 第二部分：豬膀胱脫細胞基質支架材料的制備
　　 [目的]探討豬膀胱脫細胞基質(BAMG)制備的方法及其作為生物支架材料應用于組織工程膀胱構建的可行性。
　　 [方法]綜合了攪拌、反復凍融、滲透溶液、生物酶消化等方法，制備脫細胞的膀

4、胱粘膜下基質。用HE染色檢查有無細胞成分殘留。
　　 [結果]經脫細胞處理所得膀胱粘膜下基質呈白色半透明狀，表面光滑，厚度約0.2cm，具有一定彈性及韌性。光鏡觀查無細胞成分殘留。
　　 [結論]綜合采用物理和化學方法，制備的膀胱脫細胞基質，組織相容性好，符合組織工程膀胱支架材料的要求。表明脫細胞膀胱粘膜下基質是一種較為理想的膀胱組織修復替代材料。
　　 第三部分：組織工程膀胱的體外構建及兔膀胱替代實驗
　

5、　 [目的]通過采用脂肪間充質干細胞和豬膀胱脫細胞基質構建組織工程膀胱的實驗研究，探討應用組織工程膀胱進行膀胱替代修復的可行性。
　　 [方法]以新西蘭兔自體ADSCs為種子細胞，以豬的BAMG為支架材料，將ADSCs靜態(tài)接種于BAMG表面，體外構建組織工程膀胱。新西蘭兔27只等分三組，均行膀胱部分切除術，A組用BAMG進行替代修補，B組用復合ADSCs種子細胞的BAMG進行替代修補，C組不作任何修補直接縫合，4、8、12周后

6、取材觀察組織工程膀胱的再生情況。
　　 [結果]術后A組修補區(qū)明顯攣縮，B組修補區(qū)無明顯攣縮。A組膀胱內均有結石形成，B組及C組膀胱內無結石形成。A、B兩組膀胱體積隨時間推移逐漸增加，至12周達40 ml左右，約為正常膀胱的80％左右，C組膀胱容量明顯縮小。修補區(qū)病理組織學檢查：4周時A組支架材料部分降解，修補區(qū)有大量彌漫炎細胞浸潤，主要是淋巴細胞。粘膜面未見移行上皮生長，粘膜下層有少量肌纖維形成；B組支架材料大部分降解，粘膜面

7、可見多層移行上皮生長，粘膜下層可見大量肌纖維形成及新生的毛細血管長入。8周時A組支架材料大部分降解，浸潤的炎細胞明顯減少。粘膜面可見1到2層移行上皮生長，粘膜下層可見大量膠原及少量肌纖維；B組支架材料基本降解，粘膜面可見多層移行上皮生長，粘膜下層可見大量肌纖維及少量肌束形成，新生的毛細血管數(shù)量增多，管腔增大。12周時A組B組支架材料完全降解吸收，A組修補區(qū)粘膜面可見1到2層移行上皮生長，粘膜下層可見大量的膠原和肌纖維；B組修補區(qū)粘膜面可