惡性腫瘤細胞系自發(fā)性及血清剝奪誘導老化的研究.pdf

1、【研究背景】：
　　絕大多數(shù)正常細胞被認為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進入衰老(senescence)狀態(tài)。此時細胞仍然是存活的，但是細胞基因和蛋白的表達均發(fā)生了很大變化。細胞衰老又稱老化，既不同于損傷誘導的細胞休眠，也不同于細胞生長接觸抑制所表現(xiàn)的細胞周期停滯，是一種緩慢的、由一系列基因操控的細胞死亡過程，且老化的細胞不能用常規(guī)的刺激再次誘導其分裂。老化的細胞通常表現(xiàn)為體積增大，pH6.0時表達高酶活性的β-半乳糖苷酶。細

2、胞衰老不同于凋亡，主要是以不可逆的細胞周期抑制為特點，被認為是生物體重要的腫瘤預防機制，同時也是生物體老化(aging)的一種原因。
　　在細胞生長的周期中，細胞會經(jīng)歷多種形式的生物、化學及物理應(yīng)激，導致細胞死亡或致癌性轉(zhuǎn)化。同時，細胞內(nèi)存在不同的損傷修復機制來應(yīng)對這些損傷因素，其中主要包括凋亡和衰老。細胞老化可由多種內(nèi)外源性刺激引發(fā)，包括端粒的功能障礙，癌基因的激活以及抑癌基因的失活等，但其主導機制仍然不十分清楚。
　　細

3、胞老化作為一種不可逆的生長抑制現(xiàn)象,能夠防止腫瘤細胞或非正常細胞的進一步生長，對抗永生化細胞的無限增殖能力而對機體起到保護作用。對細胞老化的信號傳導通路及其調(diào)節(jié)因子等方面的深入研究可能為腫瘤等重大疾病的預防和治療提供幫助。
　　【目的】：
　　1.探討惡性腫瘤細胞系是否普遍存在自發(fā)性老化現(xiàn)象；
　　2.研究惡性腫瘤細胞系老化現(xiàn)象的分子機制。
　　【方法】：
　　1.隨機選取10種惡性腫瘤細胞系進行相關(guān)檢測；

4、
　　2.應(yīng)用老化相關(guān)半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色檢測10種惡性腫瘤細胞系中SA-β-gal的表達情況；
　　3.檢測血清剝奪24h后10種惡性腫瘤細胞系中SA-β-gal的表達情況；
　　4.應(yīng)用免疫熒光染色法分析惡性腫瘤細胞系中PTEN基因的表達以及血清剝奪前后該基因的表達變化；
　　5.應(yīng)用miRNA芯片檢測血清剝奪24h前后miRNAs的變化，篩選老化相關(guān)的miRNAs。
　　【結(jié)果】：

5、>　　1.在未經(jīng)誘導處理且處于對數(shù)生長期的10種惡性腫瘤細胞系中，均發(fā)現(xiàn)有SA-β-gal陽性表達的細胞。但不同細胞系中，SA-β-gal陽性的老化細胞所占比例明顯不同，最高為HepG2細胞系（3.69％），最低為HeLa細胞系（0.65％）(F=13.006,P=0.000)；
　　2.SA-β-gal陽性的老化細胞不都是多倍體細胞；
　　3.給予無血清培養(yǎng)液饑餓24h后，老化細胞數(shù)目明顯增加(P=0.001)；
　

6、　4.PTEN的表達模式與SA-β-gal的一種表達模式相似，可僅出現(xiàn)在個別體積較大的細胞中，并且血清剝奪后其陽性細胞數(shù)量明顯增加；
　　5.血清剝奪24h后，多種miRNAs的表達發(fā)生了改變，其中hsa-miR-320的表達在H929和MCF7兩種惡性腫瘤細胞系中均明顯上調(diào)。
　　【結(jié)論】：
　　1.惡性腫瘤細胞系普遍存在自發(fā)性老化現(xiàn)象，但其水平明顯不同(F=13.006,P=0.000)；
　　2.老化細胞并