嚴重燙傷早期主要臟器自噬變化的實驗研究.pdf

1、目的:自噬是真核細胞內(nèi)通過單層或雙層膜包裹待降解物形成自噬體，而后與溶酶體結合形成自噬溶酶體對包裹物進行降解，降解產(chǎn)物被細胞再循環(huán)利用的過程。它是真核細胞適應營養(yǎng)或生長因子缺乏、低氧、內(nèi)質網(wǎng)應激等有害刺激所發(fā)生的一種應激反應，生理狀態(tài)下參與維持蛋白代謝平衡、細胞和機體的自身穩(wěn)態(tài)。嚴重燒傷后機體啟動全身應激系統(tǒng)及應答反應，從而引起機體固有生理反應失衡和一系列炎癥反應、氧化應激損傷、免疫功能改變等病理變化，同時牽涉各重要臟器結構和功能的變化

2、，嚴重者可誘發(fā)多器官功能不全綜合癥(MODS)等。自噬作為不同于細胞壞死和凋亡的第三種細胞死亡方式——自噬性細胞死亡，是否參與嚴重燒傷刺激所引起的一系列病理生理變化？是否在嚴重燒傷后臟器的結構與功能的變化中發(fā)揮著怎樣的作用？就目前的研究資料而言，這些問題的答案尚未不清楚。因此，本課題旨在通過研究嚴重燒傷小鼠傷后早期不同時間點時主要臟器自噬水平的變化，初步闡明嚴重燒傷早期各主要臟器自噬水平變化規(guī)律，為深入研究嚴重燒傷后臟器功能損害的發(fā)生機

3、制與防治措施提供新的思路。
　　方法:1.以BALB/C小鼠為研究對象，建立30％TBSA的Ⅲ度燙傷模型，分別于燙傷前（正常對照）及燙傷后1h、2h、6h、12h、24h采集小鼠心、肝、肺、腎臟器組織標本。2.提取各時相點各實驗小鼠心、肝、肺、腎臟器組織標本總蛋白，用蛋白免疫印跡檢測自噬相關蛋白Beclin1、LC3表達量及其變化，以反映燒傷后各時相點不同臟器的自噬相關分子水平的表達變化。3.將燙傷小鼠心、肝、肺、腎臟器組織標本制

4、備后于透射電鏡下觀察各臟器自噬現(xiàn)象及其變化情況。
　　結果:1.與傷前相比較，燙傷后1h各臟器Beclin1蛋白表達即開始有所增加，尤以肝臟增加明顯;隨后均呈現(xiàn)出逐漸緩慢上升趨勢，多在傷后12h達高峰。但在傷后24h時，四種臟器Beclin1蛋白表達卻出現(xiàn)不同的變化，心臟組織Beclin1表達繼續(xù)升高，而肝、肺、腎組織Beclin1表達則較12h明顯回落，但仍高于傷前。2.燙傷后1h四種臟器組織LC3蛋白表達均較傷前有所增加，以腎

5、臟增加明顯;隨著時間的延長，也大多呈逐漸上升趨勢，但以腎臟的上升幅度為最大，也多于傷后12h達高峰。傷后24h時四種臟器LC3表達也呈現(xiàn)不同的變化，心臟組織LC3表達繼續(xù)較12h增加，而肝、肺、腎組織LC3表達則較12h降低，但仍高于傷前水平。3.透射電鏡觀察燙傷前后心、肝、肺、腎組織細胞自噬變化的結果顯示，燙傷后6h時心、肝、肺、腎組織胞內(nèi)均出現(xiàn)自噬溶酶體增多，明顯多于傷前水平，表明臟器組織細胞自噬水平增加。
　　結論:1.嚴重