LRRC48蛋白對大鼠肝癌細胞CBRH-7919惡性表型影響的研究.pdf

1、目的:在以大鼠肝切除再生為模型研究細胞G0/G1期轉(zhuǎn)換的前期工作中，發(fā)現(xiàn)一個新蛋白LRRC48，該蛋白在大鼠肝切除后短期內(nèi)表達迅速上調(diào)，持續(xù)兩小時后開始下降，而在與其相對應的假手術組中，該蛋白的表達始終處于低水平。目前對LRRC48蛋白的功能尚無研究。本課題研究了LRRC48蛋白對大鼠肝癌細胞CBRH-7919侵襲、轉(zhuǎn)移能力等惡性表型的影響，以期增進對LRRC48蛋白功能的深入理解，從而可能對腫瘤防治產(chǎn)生積極影響。
　　 方法:

2、
　　 1.通過細胞劃痕實驗檢測LRRC48蛋白高表達/低表達對CBRH-7919細胞遷移能力的影響;
　　 2.通過Transwell侵襲實驗檢測LRRC48蛋白高表達/低表達對CBRH-7919細胞侵襲能力的影響;
　　 3.通過激光共聚焦鬼筆環(huán)肽標記法觀察細胞微絲的分布，檢測LRRC48蛋白高表達/低表達對CBRH-7919細胞骨架的影響;
　　 4.建立裸鼠皮下移植瘤模型，檢測LRRC48蛋白高表

3、達/低表達對裸鼠體重及瘤體生長的影響;
　　 5.用LRRC48蛋白高表達及對照、LRRC48蛋白低表達及對照的CBRH-7919細胞分別建立裸鼠肝癌原位模型;
　　 6.裸鼠肺組織行HE染色，檢測LRRC48蛋白高表達/低表達對肝癌的遠處轉(zhuǎn)移的影響。
　　 結果:
　　 1.細胞劃痕實驗結果顯示LRRC48蛋白高表達組細胞與其對照組相比，遷移的細胞數(shù)目增多;而LRRC48蛋白低表達組細胞與其對照相組比，

4、遷移的細胞數(shù)目減少;LRRC48蛋白高表達對照組、低表達對照組細胞與CBRH-7919細胞組相比，遷移的細胞數(shù)目較一致。
　　 2.Transwell侵襲實驗結果顯示LRRC48蛋白高表達組細胞與其對照組相比，侵襲的細胞數(shù)目增加;而LRRC48蛋白低表達組細胞與其對照組相比，侵襲的細胞數(shù)目減少;LRRC48蛋白高表達對照組、低表達對照組細胞與CBRH-7919組細胞相比，侵襲的細胞數(shù)較一致。
　　 3.鬼筆環(huán)肽標記法觀察

5、細胞微絲的分布顯示，處理組細胞的形態(tài)較未處理組細胞有所改變，處理組細胞沒有很好地鋪展開，細胞邊緣有回縮等貼壁不牢的現(xiàn)象。各組細胞形成的片狀偽足無明顯差別;
　　 4.皮下注射各組細胞5天后觀察肝癌裸鼠模型，瘤體形成，造模成功率為100％，注射LRRC48蛋白高表達組細胞的裸鼠成瘤體積大于LRRC48蛋白低表達組;后期，有的裸鼠皮下移植瘤出現(xiàn)萎縮、潰爛的現(xiàn)象，LRRC48蛋白高表達組發(fā)生率為25％(2/8)，而LRRC48蛋白低表

6、達組發(fā)生率是87.5％(7/8)，P＜0.01。
　　 5.裸鼠肝原位癌模型中，肺臟出現(xiàn)明顯轉(zhuǎn)移灶，LRRC48蛋白高表達組形成的轉(zhuǎn)移灶較LRRC48蛋白低表達組形成的轉(zhuǎn)移灶多。
　　 結論:
　　 1.細胞劃痕實驗測定結果表明LRRC48蛋白高表達使CBRH-7919細胞遷移能力增強;LRRC48蛋白低表達使CBRH-7919細胞遷移能力減弱;
　　 2.Transwell侵襲實驗測定結果表明LRRC4