肝癌細(xì)胞粘附和收縮調(diào)節(jié)對(duì)Rho蛋白表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、Rho蛋白是細(xì)胞內(nèi)多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵分子，可參與對(duì)正常細(xì)胞增殖、分化、凋亡的調(diào)控，其表達(dá)受到細(xì)胞骨架功能狀態(tài)的反饋調(diào)節(jié)。在腫瘤細(xì)胞中Rho蛋白表達(dá)普遍增高，Rho蛋白表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。由于腫瘤細(xì)胞骨架發(fā)育存在缺陷，由此導(dǎo)致的骨架功能異常與其Rho蛋白表達(dá)增高是否存在相關(guān)性。本課題研究細(xì)胞不同的粘附和收縮行為對(duì)Rho蛋白表達(dá)和細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)特性的影響，從而探索肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的過(guò)程機(jī)制。
　　目的：本文通過(guò)控制細(xì)

2、胞粘附和收縮行為，比較正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞在不同預(yù)張力狀態(tài)下其Rho蛋白表達(dá)變化的趨勢(shì)，以及這種改變對(duì)細(xì)胞遷移、增殖特性的影響，這對(duì)揭示肝癌細(xì)胞遷移行為的胞內(nèi)分子基礎(chǔ)有一定意義。
　　方法：運(yùn)用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，免疫組織化學(xué)技術(shù)，分別對(duì)肝癌細(xì)胞，正常肝細(xì)胞Rho蛋白表達(dá)水平，以及FN裱襯前后肝癌細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力進(jìn)行檢測(cè)和分析；通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)技術(shù)對(duì)裱襯FN的不同粘附狀態(tài)，用MLCK抑制劑ML-7作用下細(xì)胞的不同收縮狀態(tài)，以及機(jī)械加載

3、條件下肝癌細(xì)胞、正常肝細(xì)胞骨架變化和Rho蛋白表達(dá)分布進(jìn)行檢測(cè)和定量分析，從而了解細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)功能狀態(tài)對(duì)Rho蛋白表達(dá)分布的影響趨勢(shì)，以及這些改變與肝癌細(xì)胞遷移增殖行為變化的相關(guān)性。
　　結(jié)果：（1）肝癌細(xì)胞 Rho蛋白的基礎(chǔ)水平高于正常肝細(xì)胞；裱襯1-5μg/ml FN肝癌細(xì)胞Rho蛋白表達(dá)水平升高，裱襯10-20μg/ml FN Rho蛋白表達(dá)水平下降，但裱襯40μg/ml FN Rho蛋白表達(dá)水平開(kāi)始上調(diào)；而在正常肝細(xì)胞中裱

4、襯FN后Rho蛋白表達(dá)水平顯著降低；（2）隨著裱襯FN濃度的增加，HepG2肝癌細(xì)胞粘附率增加，對(duì)增殖的抑制作用越發(fā)明顯；（3）裱襯低濃度FN（2μg/ml），細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力明顯增加，而高濃度FN（20μg/ml）時(shí)，細(xì)胞在1h的凈位移和遷移軌跡離散度均減少；（4）MLCK抑制劑ML-7低濃度（6μM）使正常肝細(xì)胞Rho蛋白表達(dá)下調(diào)，而對(duì)肝癌細(xì)胞Rho蛋白無(wú)明顯影響，ML-7高濃度（10μM）肝癌細(xì)胞骨架解聚，較正常細(xì)胞明顯；兩組細(xì)胞