油酸通過未折疊蛋白反應調節(jié)腸粘膜上皮細胞膽固醇轉運相關蛋白的表達.pdf

1、油酸是食用油的主要成分。已有研究表明，在腸粘膜上皮細胞中，與其它脂肪酸相比，油酸是一種公認的具有強的誘導富含甘油三酯脂蛋白合成與分泌的脂肪酸，它通過促進胞膜膽固醇向內質網運輸，增加膽固醇及其酯的分泌，此外，在無外源膽固醇的條件下，油酸可促進膽固醇的合成。動物實驗結果表明，在高膽固醇的條件下，高濃度的油酸可降低膽固醇的吸收率，流行病學調查的結果表明，油酸具有降低血漿LDL膽固醇濃度的作用，與多不飽和脂酸一道被稱為“健康脂酸”。然而，在腸粘

2、膜上皮細胞中，油酸影響膽固醇的吸收與運輸機制，目前還不清楚。
　　 高膽固醇血癥是導致動脈粥樣硬化的重要危險因子。除機體自身合成的膽固醇外，食物膽固醇是導致高膽固醇血癥的重要因素，減少小腸對食物與膽汁膽固醇的吸收有利于降低血液膽固醇的水平；因此小腸在保持機體膽固醇穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用。NPC1L1 (Niemann-Pick C1-Like 1)，分布在腸粘膜上皮細胞刷狀緣側，是負責膽固醇吸收的重要轉運體，NPC1L1敲除的小鼠

3、完全抵抗食物誘導的高膽固醇血癥，即使用高膽固醇的食物飼養(yǎng)，也不會患高膽固醇血癥。ABCG5/8異二聚體也分布在腸粘膜上皮細胞刷狀緣側，通過促進固醇的外排調節(jié)膽固醇的吸收。HMGCR是膽固醇合成的限速酶。部分合成與吸收的膽固醇在內質網上經?；o酶A∶膽固醇?；D移酶2（Acyl-Coenzyme A CholesterolAcyltransferase,ACAT2）催化形成膽固醇酯。在腸與肝中，富含甘油三酯的酯蛋白的裝配與分泌，MTP（M

4、icrosomal triglyceride transfer protein）是必不可少的重要轉運體。固醇調節(jié)元件結合蛋白-2(sterol regulatoryelement-binding protein-2，SREBP-2)是結合在內質網上的轉錄因子，經蛋白裂解活化，促進膽固醇合成與吸收基因的表達。已有文獻報道，它正向調節(jié)NPC1L1、HMGCR(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase)

5、的表達，負向調節(jié)MTP的表達。
　　內質網是蛋白質合成、折疊，合成膽固醇及脂酸，維持鈣離子穩(wěn)態(tài)的重要場所。當內質網的功能受到干擾，內質網應激發(fā)生，通過內質網應激活化一系列基因的表達，增加內質網處理未折疊蛋白的能力，減少內質網應激造成的壓力。已有文獻報道，內質網應激通過未折疊蛋白反應(unfolded protein response，UPR)信號通路促進或抑制SREBP-2的成熟，進而調節(jié)其調控的基因的表達。近年來的研究表明，內

6、質網應激通過未折疊蛋白反應（UPR）的不同信號通路正向或負向調節(jié)SREBP-2調控的基因表達。已有文獻報道，油酸可引起肝細胞發(fā)生內質網應激，從而影響apoB100的分泌。但是，在腸粘膜上皮細胞膽固醇吸收過程中，油酸是否可引起內質網應激，進而影響膽固醇轉運相關蛋白的表達，目前還不是很清楚.
　　 本文用腸粘膜上皮細胞CaCo-2作模型，用各種脂質微團溫育細胞，探討油酸對腸粘膜上皮細胞膽固醇吸收、轉運相關蛋白表達的影響，以及油酸誘導

7、的UPR對膽固醇關鍵轉運蛋白的調節(jié)作用.用?；悄懰徕c（TC 5mM），TC與膽固醇(CHOL 0.2mM)、TC與油酸(0.25mM,0.5mM,1.0 mM)及膽固醇(CHOL 0.2mM)、以及TC與油酸(0.25mM,0.5mM,1.0 mM)制備的脂質微團孵育CaCo-2細胞，24 小時后，用RT-PCR檢測NPC1L1、ABCG8、HMGCR、ACAT-2、MTP、剪切型XBP1、CHOP mRNA 水平的變化,用Wester

8、n Blotting檢測BIP、ATF6(Activating transcription factor-6)、SREBP2、NPC1L1、ABCG8 蛋白水平的變化。并利用UPR的抑制劑4-苯基丁酸（4-phenyl-butyric acid，PBA）抑制UPR，闡明UPR 在調節(jié)膽固醇相關轉運蛋白表達中的作用。
　　 實驗結果顯示：用不同的脂質微團孵育CaCo-2細胞，在mRNA與蛋白水平ACAT-2的表達無變化；蛋白水平S

9、REBP-2的表達無變化；在有或無微團膽固醇的條件下，高濃度的油酸（0.5mM、1mM）增加了剪切型XBP1(X-box bindingprotein 1)mRNA的數(shù)量，增加了BIP（immunoglobulin heavy chain-bindingprotein）蛋白及CHOP（DNA-damage-inducible transcript 3）的表達，促進了ATF-6的成熟，誘發(fā)了內質網應激；在有微團膽固醇的條件下，油酸以濃度依

10、賴的方式增加了ABCG8的表達；降低了NPC1L1、HMGCR的表達，MTP的表達顯著增加；相反，在無微團膽固醇存在的條件下，油酸，增加了NPC1L1、HMGCR的表達。
　　 用UPR的抑制劑PBA 處理細胞，PBA 抑制了XBP1的選擇性剪接與ATF-6的成熟，消除了油酸引起的CHOP和BIP表達上調，抑制了內質網應激的發(fā)生。
　　 用PBA 處理細胞，抑制了高濃度的油酸通過內質網應激引起的NPC1L1、HMGCR、