姜黃素對人肝L-02細胞膽固醇合成及轉運蛋白表達的影響.pdf

1、目的:研究姜黃素對人肝L-02細胞脂滴形成、膽固醇合成限速酶-HMG-CoA還原酶和轉運蛋白Caveolin-1表達及細胞內膽固醇、膽固醇酯含量的影響,了解姜黃素對肝細胞膽固醇合成及轉運的作用。
　　方法:取正常人肝L-02細胞,和經(jīng)50％胎牛血清造模24小時建立的脂變肝細胞模型,共同作為研究對象。實驗分為7組:第一組為空白對照,即正常肝細胞組;第二組為脂變肝細胞組;第三組至第六組在脂變細胞中分別加入不等量姜黃素,使姜黃素終濃度分

2、別為0、12.5umol/l、25umol/l、50umol/l和100umol/l;第七組為陽性對照組,即脂變肝細胞加入普羅布考,使其終濃度為50umol/l;第八組為正常肝細胞加50umol/l姜黃素對照組。每組加藥后繼續(xù)孵育24小時。油紅O染色觀察每組細胞內脂滴的形成情況。高效液相色譜法(HPLC)檢測細胞內膽固醇(TC)、游離膽固醇(FC)和膽固醇酯(CE)的含量,并計算細胞內CE/TC比值及培養(yǎng)基FC含量。RT-PCR法檢測每

3、組肝細胞HMG-CoA還原酶及轉運蛋白caveolin-1 mRNA水平的表達,從而確定姜黃素降低細胞CE的最佳濃度,作出量效關系。然后以姜黃素的最佳濃度處理細胞不同的時間,即0小時、6小時、12小時、24小時,再分別檢測各組細胞HMG-CoA還原酶和caveolin-1 mRNA水平的表達,高效液相色譜法檢測細胞膽固醇含量,確定姜黃素降低細胞CE的最佳時間,作出時效關系。實驗數(shù)據(jù)以±s表示,用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析

4、,以P<0.05作為差異顯著性標準。
　　結果:經(jīng)50%胎牛血清孵育24小時后,倒置顯微鏡下可觀察到L-02細胞脂肪變性,胞漿內充滿大量可被油紅O紅染的脂滴,且高效液相色譜法檢測細胞內外膽固醇含量均明顯增加(P﹤0.05),示脂變肝細胞模型成功建立。經(jīng)不同濃度的姜黃素(0umol/l、12.5umol/l、25umol/l、50umol/l、100umol/l)處理脂變肝細胞24小時,結果顯示:油紅O染色表明,細胞內脂滴較處理前減

5、少。姜黃素呈濃度依賴性的降低脂變肝細胞細胞內TC、CE,增加培養(yǎng)基中FC含量,同時呈濃度依賴性的減少 HMG-CoA還原酶的表達、增加 caveolin-1 mRNA的表達。將100umol/l的姜黃素與脂變肝細胞共同處理0,6,12,24小時,結果顯示:細胞內脂滴呈時間依賴性減少;姜黃素呈時間依賴性的降低脂變細胞內TC、CE,增加培養(yǎng)基中FC含量,同時呈時間依賴性的減少HMG-CoA還原酶的表達、增加caveolin-1mRNA的表達