非創(chuàng)傷性股骨頭壞死骨髓干細(xì)胞治療及髖關(guān)節(jié)置換術(shù)療效研究.pdf

1、第一部分、脂肪來(lái)源干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞的研究
　　目的:非創(chuàng)傷性股骨頭壞死早期（Ⅰ、Ⅱ期）可通過(guò)骨髓干細(xì)胞移植來(lái)獲得臨床和形態(tài)學(xué)改善，骨髓干細(xì)胞具有多向分化潛能，能夠在體內(nèi)微循環(huán)環(huán)境影響、應(yīng)力作用及血液供應(yīng)條件誘導(dǎo)下，向成骨細(xì)胞分化，進(jìn)而促進(jìn)股骨頭成骨、再血管化，進(jìn)而達(dá)到修復(fù)壞死股骨頭的目的。但在臨床工作中，自體骨髓干細(xì)胞的采集較為困難，同時(shí)存在采集量少及分離提取步驟繁瑣等缺點(diǎn)，故臨床上很難獲得足夠的骨髓干細(xì)胞數(shù)

2、量，從而導(dǎo)致成骨細(xì)胞(Osteoblast，OB)來(lái)源不足。
　　作為骨修復(fù)工程的重大難題，成骨細(xì)胞來(lái)源較少、細(xì)胞分化又相對(duì)復(fù)雜等問(wèn)題一直制約著骨修復(fù)的進(jìn)步和發(fā)展，因此積極探索成骨細(xì)胞的其他來(lái)源對(duì)治療骨折，甚至治療早期股骨頭壞死均具有重要的意義。
　　脂肪來(lái)源干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)具有一般干細(xì)胞的特點(diǎn):它屬于多分化潛能細(xì)胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞，因此對(duì)脂肪

3、干細(xì)胞進(jìn)行定向誘導(dǎo)可分化為成骨細(xì)胞。此外，與其他細(xì)胞相比有以下優(yōu)勢(shì):取材容易，體外增殖速度快，ADSCs能夠進(jìn)行自體移植，無(wú)免疫排斥反應(yīng)等。脂肪來(lái)源干細(xì)胞所具有的修復(fù)、替代和再生能力為臨床醫(yī)學(xué)尤其是骨外科提供了一個(gè)發(fā)展新療法的機(jī)會(huì)，它可以轉(zhuǎn)化成損傷的成骨細(xì)胞、組織和器官，進(jìn)而起到組織修復(fù)與再生作用。
　　方法:利用實(shí)驗(yàn)法，取成年大鼠脂肪分離獲得ADSCs經(jīng)細(xì)胞免疫熒光法、RT-PCR法鑒定ADSCs獲得純化后的細(xì)胞，利用化學(xué)試劑法

4、將ADSCs誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞。
　　結(jié)果:經(jīng)茜素紅S化學(xué)染色法進(jìn)行染色、RT-PCR檢測(cè)成骨細(xì)胞特異性基因的表達(dá)與否、及其誘導(dǎo)前后的堿性磷酸酶含量的變化情況，鑒定誘導(dǎo)后的成骨細(xì)胞，結(jié)果顯示我們成功的將ADSCs誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞。
　　結(jié)論:分離的ADSCs經(jīng)細(xì)胞免疫熒光法、RT-PCR法等方法鑒定，其表面標(biāo)志鑒定結(jié)果與以往研究結(jié)果相一致，CD13，CD29，CD44，CD71，CD90，CD105陽(yáng)性表達(dá)，而CD34，vWF

5、陰性表達(dá)，并通過(guò)化學(xué)誘導(dǎo)劑法將脂肪干細(xì)胞成功的誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞，可以用于后續(xù)動(dòng)物模型試驗(yàn)中股骨頭壞死的修復(fù)與治療，并在不遠(yuǎn)的將來(lái)逐步應(yīng)用到股骨頭壞死的臨床治療中。
　　第二部分、髓芯減壓聯(lián)合自體骨髓干細(xì)胞移植、多孔鉭棒植入術(shù)微創(chuàng)治療早期股骨頭壞死的療效分析
　　目的:股骨頭壞死(osteonecrosis of the femoral head，ONFH)是股骨頭血供障礙導(dǎo)致骨細(xì)胞缺血性壞死的一種漸進(jìn)性疾病，多見(jiàn)于中青年，是臨

6、床骨科的常見(jiàn)病。許多患者因未及時(shí)、有效治療而最終不得不接受人工髖關(guān)節(jié)置換術(shù)。傳統(tǒng)的單純髓芯減壓治療早期股骨頭壞死的療效受大多學(xué)者肯定，但由于術(shù)后股骨頭軟骨下骨板缺乏有效結(jié)構(gòu)支撐，易造成塌陷、骨折等并發(fā)癥，因此仍存有爭(zhēng)議。近年來(lái)，隨著對(duì)ONFH發(fā)病機(jī)制的深入研究，多孔金屬鉭棒治療早期ONFH成為了研究熱點(diǎn)，其與人體有高度的生物相容性，能促進(jìn)壞死區(qū)再血管化，且與骨骼彈性模量相當(dāng)，可起到良好的支撐作用;同時(shí)，利用自體骨髓干細(xì)胞的多向分化潛能促

7、進(jìn)股骨頭內(nèi)成骨、再血管化，進(jìn)而修復(fù)壞死股骨頭的干細(xì)胞技術(shù)也成為了熱門課題。這些技術(shù)在臨床上均已取得一定療效，為ONFH的進(jìn)一步治療提供了廣闊的發(fā)展前景。如果將3種技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用治療早期ONFH效果會(huì)如何呢？目前鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。
　　為此，我們采用髓芯減壓聯(lián)合自體骨髓干細(xì)胞移植、多孔鉭棒植入術(shù)微創(chuàng)治療早期ONFH并隨訪觀察其臨床療效。
　　方法:據(jù)國(guó)際骨循環(huán)學(xué)會(huì)(ARCO)分期標(biāo)準(zhǔn)，選取2011年1月～2012年6月共30例(36

8、髖)早期（Ⅰ、Ⅱ期）ONFH患者在我院行髓芯減壓聯(lián)合自體骨髓干細(xì)胞移植、多孔鉭棒植入術(shù)微創(chuàng)治療。其中男21例，女9例，年齡36～60歲，平均41.57歲;病程為15～32個(gè)月，平均22.53個(gè)月。每位患者均采用統(tǒng)一的術(shù)式:經(jīng)自體骨髓干細(xì)胞采集、分離、髓芯減壓后，植入骨髓干細(xì)胞和多孔鉭棒。術(shù)前及術(shù)后隨訪過(guò)程中根據(jù)Harris評(píng)分和改良賓夕法尼亞州立大學(xué)骨壞死放射學(xué)分期系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估。
　　結(jié)果:隨訪15-32個(gè)月，隨訪時(shí)行Harris

9、評(píng)分和影像學(xué)檢查。(1)臨床療效評(píng)價(jià):采用髖關(guān)節(jié)Harris評(píng)分，由術(shù)前的(54.30+9.42)分，提高到術(shù)后6個(gè)月的(67.26±6.35)分，和末次隨訪時(shí)的(83.26±8.15)分，優(yōu)良率為88.89％，與術(shù)前比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。末次隨訪時(shí)，所有患者髖關(guān)節(jié)疼痛癥狀均減輕或消失，髖關(guān)節(jié)活動(dòng)度明顯增大，功能改善。Harris評(píng)分指標(biāo)中，以疼痛指數(shù)改變最為顯著。(2)影像學(xué)療效評(píng)價(jià):末次隨訪時(shí)本組病例組無(wú)一例發(fā)展為

10、ARCOⅢ期塌陷，但有4例進(jìn)展為ARCOⅡ期。根據(jù)改良賓夕法尼亞州立大學(xué)骨壞死放射學(xué)分期系統(tǒng)，6期共15種亞期按總分15分評(píng)定，由術(shù)前的（10.18±1.79）分升高至末次隨訪時(shí)的（12.56±1.31）分，平均提高2.41分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:髓芯減壓聯(lián)合自體骨髓干細(xì)胞移植、多孔鉭棒植入術(shù)微創(chuàng)治療早期ONFH是一種創(chuàng)傷小、安全、有效的方法，可使早期ONFH患者獲得滿意的臨床療效，但尚需大樣本臨床試驗(yàn)及

11、長(zhǎng)期隨訪進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　第三部分、生物型全髖關(guān)節(jié)置換治療青壯年晚期股骨頭壞死的近期療效分析
　　目的:股骨頭壞死(osteonecrosisofthe femoral head，ONFH)是股骨頭血供障礙導(dǎo)致骨細(xì)胞缺血性壞死的一種漸進(jìn)性疾病，常見(jiàn)于青壯年。股骨頭壞死進(jìn)展快，保守治療效果往往不佳。據(jù)統(tǒng)計(jì)約60％-80％未經(jīng)有效治療的患者將在1-5年內(nèi)出現(xiàn)股骨頭塌陷甚至變形，其中多數(shù)又將在2-3年內(nèi)進(jìn)展至股骨頭壞死晚期而需行人

12、工髖關(guān)節(jié)置換術(shù)。目前人工全髖關(guān)節(jié)置換作為一種成熟而經(jīng)典的治療手段已獲得眾多患者和臨床骨科醫(yī)師的普遍認(rèn)可。由于青壯年晚期ONFH患者髖關(guān)節(jié)活動(dòng)強(qiáng)度與頻率較大，將來(lái)可能會(huì)面臨人工關(guān)節(jié)翻修問(wèn)題，而文獻(xiàn)報(bào)道傳統(tǒng)的骨水泥型全髖關(guān)節(jié)假體置換術(shù)后翻修率較高、翻修難度大，因此，如何延長(zhǎng)假體使用壽命，同時(shí)保留更多骨質(zhì)方便將來(lái)翻修是施行初始全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)的骨科醫(yī)師所必須慎重考慮的重要因素。
　　為此，我們對(duì)青壯年晚期ONFH患者采用近年來(lái)臨床應(yīng)用廣泛

13、、保留骨質(zhì)較多的非骨水泥生物型Ribbed假體進(jìn)行全髖關(guān)節(jié)置換，并隨訪觀察其術(shù)后近期臨床療效。
　　方法:對(duì)2010年6月～2011年10月在我院接受采用生物型Riberd假體行初次全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)治療的27例32髖青壯年晚期股骨頭壞死患者資料進(jìn)行回顧性研究分析。所有患者根據(jù)國(guó)際骨循環(huán)學(xué)會(huì)(ARCO)分期均為Ⅲ期以上，其中男17例，女10例;年齡27-58歲，平均41.7歲;均采用后外側(cè)入路。采用Harris髖關(guān)節(jié)評(píng)分和WOMAC骨

14、關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)估患者術(shù)前及術(shù)后隨訪時(shí)的髖關(guān)節(jié)功能。術(shù)后隨訪時(shí)拍攝雙髖X線片了解假體的位置以及有無(wú)松動(dòng)、周圍有無(wú)骨質(zhì)吸收情況。
　　結(jié)果:失訪1例，26例30髖獲得隨訪，隨訪時(shí)間23～39個(gè)月，平均28.5個(gè)月。術(shù)后4例患者出現(xiàn)雙下肢不等長(zhǎng)，但長(zhǎng)度差值＜2cm。所有患者術(shù)后隨訪期間未發(fā)生感染、股骨頸骨折、下肢深靜脈血栓、肺栓塞等嚴(yán)重并發(fā)癥。術(shù)后所有患者髖關(guān)節(jié)疼痛癥狀均明顯改善或消失，無(wú)一例出現(xiàn)髖關(guān)節(jié)翻修，末次隨訪X線片上假體位置良好，