P物質對腦膜炎奈瑟菌抗原誘導小膠質細胞表達COX-2及分泌PGE2的影響及分子機制初探.pdf

1、目的:觀察P物質對腦膜炎奈瑟菌抗原（NMA）誘導小膠質細胞（MG）表達環(huán)氧化酶2（COX-2）及產生前列腺素E2（PGE2）的影響，并初步探討其可能發(fā)生的作用機制。
　　方法:體外原代培養(yǎng)大鼠小膠質細胞，并根據不同的實驗目的分為5組：（1）空白對照組（僅給予等體積DMEM/F12培養(yǎng)基）；（2）NMA處理組（加入10μg/ml超聲處理的粗抗原作用8h）；（3）單純SP組（加入1 nmol/L SP作用8h）；（4）SP組+NMA組

2、：抗原刺激的同時加入1 nmol/L SP作用8h；（5）SP受體拮抗劑組：小膠質細胞加入10nmol/L SP受體拮抗劑L-703,606預處理15min。處理結束后，實時定量PCR檢測COX-2 mRNA的表達，ELISA檢測PGE2產生，Western blot分析核轉錄因子NF-κB p65亞基的轉位以及PGE2受體EP2和EP4的表達。
　　結果:
　　1.實時定量PCR結果顯示，單純SP處理組或單純NMA處理組C

3、OX-2 mRNA表達水平均明顯高于陰性對照組，分別為（0.24±0.061 VS0.03±0.032,P<0.05）和（0.32±0.042 VS0.03±0.032, P<0.05），而同時進行SP和NMA共同孵育后，COX-2 mRNA水平顯著高于NMA單獨處理組（0.80±0.052 VS0.32±0.042, P<0.05）。此外，用SP受體拮抗劑L-703,606處理MG后，能降低SP對COX-2 mRNA表達的協(xié)同作用（0

4、.43±0.086 VS0.80±0.052,P<0.05）。
　　2. ELISA結果顯示，單純SP能在一定程度上誘導MG細胞產生PGE2，[(24.35±4.27) pg/mL VS(18.45±3.31) pg/mL,P<0.05]，單純NMA能誘導MG細胞分泌PGE2水平明顯增高[（47.52±10.34）pg/mLVS(18.45±3.31) pg/mL, P<0.05）]；NMA和SP共同孵育后，PGE2分泌水平較NM

5、A對照組顯著增高[（126.47±14.68）pg/mL, P<0.05）。而L-703,606預處理后，PGE2分泌水平較SP＋NMA組明顯降低[（59.61±5.52）pg/mL, P<0.05]。
　　3. Western blot結果顯示，NMA刺激MG后，NF-κB p65亞基轉位進入細胞核水平較陰性對照組明顯增高（P<0.05）。而NMA與SP聯(lián)合作用后，細胞核中p65水平較NMA對照組顯著增高。SP受體拮抗劑 L-7

6、03,606預處理能降低SP＋NMA誘導的p65轉位。
　　4.單純NMA或SP處理組對PGE2受體EP2、EP4表達水平無明顯影響。而NMA聯(lián)合SP處理4h后，EP2和EP4受體表達水平顯著增高。L-703,606預處理后，SP＋NMA誘導的EP2和 EP4表達水平明顯降低。
　　結論:
　　1．SP能協(xié)同NMA誘導MG表達COX-2 mRNA和分泌PGE2增加，并能促進前列腺素受體EP2和EP4表達增加；