順鉑聯(lián)合替吉奧對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞株抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的：研究順鉑聯(lián)合替吉奧體外對(duì)人胃癌 MGC-803細(xì)胞株的抗腫瘤作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討，為順鉑聯(lián)合替吉奧提供應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)以及理論依據(jù)。
　　方法：首先應(yīng)用四氮唑鹽（MTT）法進(jìn)行初步試驗(yàn)，檢測(cè)順鉑聯(lián)合替吉奧對(duì)體外培養(yǎng)的人胃癌MGC-803細(xì)胞株的抗腫瘤作用的影響；之后再進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，主要方法為應(yīng)用倒置顯微鏡、細(xì)胞圖片后進(jìn)行HE染色以及透射電鏡對(duì)胃癌
　　MGC-803進(jìn)行觀察；然后進(jìn)行周期分布相和細(xì)胞凋亡

2、率的檢測(cè)，其方法為采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用后胃癌MGC-803的作用結(jié)果；在各種結(jié)果測(cè)定完畢后進(jìn)行機(jī)制探討，方法為利用免疫組織化學(xué)法，檢測(cè)Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9三種蛋白的表達(dá)情況，深入探討順鉑聯(lián)合替吉奧對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞株誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制。
　　結(jié)果：（1）四氮唑鹽（MTT）法結(jié)果顯示：順鉑聯(lián)合替吉奧對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞株具有抗增值作用，并且其抑制率與用藥劑量呈正相關(guān)，隨著藥物

3、濃度增加抑制率亦呈上升趨勢(shì)（P<0.01）；（2）HE染色結(jié)果顯示：順鉑聯(lián)合替吉奧在終濃度為20μg/ml時(shí)作用于胃癌 MGC-803細(xì)胞后出現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)改變，可見有部分細(xì)胞形成凋亡小體。細(xì)胞可見核固縮、核碎裂以及核溶解等凋亡表現(xiàn)；（3）倒置顯微鏡結(jié)果顯示：順鉑聯(lián)合替吉奧20μg/ml作用后細(xì)胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)變化：細(xì)胞失去原來(lái)的多角形結(jié)構(gòu)，變?yōu)閳A形凋亡細(xì)胞；甚至可見部分細(xì)胞完全破碎，成為死亡細(xì)胞，在鏡下呈碎片表現(xiàn)；（4）透射電鏡觀察結(jié)果

4、顯示：順鉑聯(lián)合替吉奧20μg/ml作用于胃癌 MGC-803細(xì)胞后，細(xì)胞核染色質(zhì)聚集成團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)，可見染色質(zhì)部分有斷裂的表現(xiàn)，可有凋亡小體形成；（5）流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果進(jìn)一步表明：順鉑聯(lián)合替吉奧可以誘導(dǎo)胃癌MGC-803發(fā)生凋亡，細(xì)胞周期蛋白檢測(cè)結(jié)果表現(xiàn)出GO/G1期比值顯著增加（P﹤0.01），而S期和G2/M期比值下降,這說(shuō)明細(xì)胞周期阻滯出現(xiàn)在GO/G1期；（6）免疫細(xì)胞化學(xué)機(jī)制探討結(jié)果表明：順鉑聯(lián)合替吉奧作用后與對(duì)照組（PBS）相

5、比較Caspase—3、Caspase-8和Caspase-9表達(dá)呈增加趨勢(shì)，結(jié)果顯著（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、順鉑聯(lián)合替吉奧對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞株具有抗增殖作用。
　　2﹑由于大量凋亡小體或者凋亡細(xì)胞的出現(xiàn)，可以證明順鉑聯(lián)合替吉奧對(duì)胃癌MGC-803抗增殖作用在20μg/ml時(shí)主要是導(dǎo)致凋亡。
　　3、順鉑聯(lián)合替吉奧對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞株的抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡，其機(jī)理依據(jù)實(shí)驗(yàn)證明主要可能是抑