替尼泊甙與草酸鉑、順鉑聯(lián)合用藥對(duì)胃癌細(xì)胞殺傷作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、胃癌在我國(guó)是最常見(jiàn)腫瘤之一。目前據(jù)Parkin最新報(bào)道其發(fā)生率位居第四位,死亡率僅次于肺癌占第二位。手術(shù)是主要的治療措施,但由于多數(shù)患者有不同程度微轉(zhuǎn)移的存在,術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的晚期胃癌患者臨床上十分多見(jiàn),因此化療在胃癌綜合治療中處于非常重要的地位。目前國(guó)內(nèi)外常用的化療方案有效率在50％~70％,但是仍有一部分胃癌患者治療失敗。近年來(lái)研究表明惡性腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性下降是影響治療效果的主要原因。替尼泊甙(VM-26)是拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制

2、劑,被美國(guó)FDA批準(zhǔn)應(yīng)用于多種腫瘤的治療。VM-26作用機(jī)制是通過(guò)抑制TopoⅡ,干擾DNA的雙鏈斷裂再連接作用,阻止細(xì)胞的復(fù)制轉(zhuǎn)錄功能,將細(xì)胞阻滯在G2/M期,誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。該藥在臨床上的應(yīng)用十分廣泛。該藥因良好的腦膜通透性,在小細(xì)胞肺癌,腦瘤,血液系統(tǒng)腫瘤和淋巴瘤等治療上占有重要的位置,但在胃癌方面報(bào)道較少。在胃癌的臨床治療中,省醫(yī)腫瘤科首次將VM-26,DDP,5-FU這三種有協(xié)同作用的藥物聯(lián)合組成了VDF方案治療中晚期胃癌,有

3、效率達(dá)71％,并與常用的EDF(VP-16+DDP+5-FU)方案(有效率48.8％)比較,差異有顯著意義。實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)研究結(jié)果也進(jìn)一步說(shuō)明了VDF方案設(shè)計(jì)的合理性和科學(xué)性。草酸鉑和順鉑均為胃癌化療的一線藥物,這兩種藥物雖然都是鉑類(lèi),作用位點(diǎn)都是細(xì)胞的DNA(草酸鉑對(duì)RNA亦有作用),但兩藥無(wú)交叉耐藥性,并且副作用不疊加,有報(bào)道提到兩藥有協(xié)同作用,但兩藥聯(lián)用國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少,替尼泊甙(VM-26)與草酸鉑兩藥聯(lián)用及替尼泊甙(VM-26)、草

4、酸鉑與順鉑三藥聯(lián)用報(bào)道更少。
　　本實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕懻?
　　1.雙藥(替尼泊甙與+草酸鉑)聯(lián)合應(yīng)用是否強(qiáng)于單藥(草酸鉑)對(duì)胃癌細(xì)胞的殺傷作用及增效機(jī)制;
　　2.在上述基礎(chǔ)上三藥(替尼泊甙+草酸鉑+順鉑)聯(lián)合應(yīng)用能否強(qiáng)于雙藥(替尼泊甙+草酸鉑)聯(lián)用對(duì)胃癌細(xì)胞的殺傷作用增效機(jī)制。
　　3.在求證以上結(jié)果的試驗(yàn)中,進(jìn)一步明確三藥(替尼泊甙+草酸鉑+順鉑)聯(lián)用時(shí)可否減少藥物用量并取得增效結(jié)果,從而為以后的臨床工作提供理

5、論依據(jù)。
　　材料與方法:
　　1.細(xì)胞選用人胃腺癌細(xì)胞株BGC-823;
　　2.實(shí)驗(yàn)藥物選用VM-26(teniposide)以及常用的化療藥物順鉑(cisplatine,DDP),草酸鉑(oxaliplatine,OXA)
　　3.MTT比色法測(cè)定單藥及聯(lián)合用藥的不同濃度處理后細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率,
　　4.并選用較小的濃度組用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的周期分布和凋亡率的變化
　　5.免疫組化測(cè)定凋亡相關(guān)

6、基因capase-9,livin的蛋白表達(dá)的影響。
　　6.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,計(jì)量資料,采用正態(tài)性檢驗(yàn),方差齊性檢驗(yàn)均數(shù)間的兩兩比較采用LSD方法;率的比較采用X2檢驗(yàn),單樣本t檢驗(yàn),以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果:1.MTT法結(jié)果顯示不同濃度的OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP處理細(xì)胞48h后,處理組與對(duì)照組以及各處理組之間OD值的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),各組藥

7、物的IC50值分別為20.00μg/ml、3.38/1.51μg/ml、0.87/0.39/0.52μg/ml。結(jié)果表明,OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP等藥物可有效的抑制胃癌細(xì)胞BGC-823的生長(zhǎng),其抑制效應(yīng)在一定的濃度范圍內(nèi)存在著劑量效應(yīng)關(guān)系。雙藥抑制效應(yīng)比單藥的抑制效應(yīng)強(qiáng),三藥抑制效應(yīng)比雙藥的抑制效應(yīng)強(qiáng),個(gè)處理組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。在相同摩爾濃度下,對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制作用由強(qiáng)到弱為OXA/VM-

8、26/DDP>OXA/VM-26>OXA。
　　2.免疫組化結(jié)果顯示,2.5μg/ml的OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP處理胃癌細(xì)胞BGC-82348h后,凋亡相關(guān)基因caspase-9的蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯增加,livin蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率明顯減少。處理組與對(duì)照組及各處理組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示,三組藥物處理細(xì)胞后流式細(xì)胞圖上均出現(xiàn)典型的亞二倍體凋亡峰。單藥組(

9、OXA)在0、12、24、48h細(xì)胞的凋亡率為3.80％、5.89％、13.52％、31.68％;雙藥組(OXA/VM-26)在0、12、24、48h細(xì)胞的凋亡率為3.90％、11.99％、38.25％、69.11％;三藥組(OXA/VM-26/DDP)在0、12、24h,細(xì)胞的凋亡率為3.73％、42.79％、85.25％(本組細(xì)胞48h時(shí)大量凋亡,未做統(tǒng)計(jì))。三組藥物處理細(xì)胞后,在0、12、24、48h,單藥組G2/M細(xì)胞為24.8

10、6％、17.89％、11.32％、3.76％;S期細(xì)胞為29.32％、33.57％、38.92％、43.27％;雙藥組為G2/M細(xì)胞為27.02％、21.53％、16.32％、2.06％;S期細(xì)胞為30.42％、34.67％、39.81％、46.72％;三藥組為G2/M細(xì)胞為29.02％、18.35％、7.15％、0.76％;S期細(xì)胞為28.32％、39.74％、52.63％、65.86％。各組與Oh相比,細(xì)胞凋亡和周期的變化均有統(tǒng)計(jì)學(xué)

11、意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:1.OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP可抑制胃腺癌細(xì)胞BGC-823的生長(zhǎng),這種抑制作用在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。在相同摩爾濃度下,對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制作用由強(qiáng)到弱為OXA/VM-26/DDP>OXA/VM-26>OXA。
　　2.OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP均可上調(diào)凋亡相關(guān)基因caspase-9的蛋白表達(dá),可下調(diào)凋亡抑制基因livin蛋白的表達(dá)