內質網(wǎng)分子伴侶GRP78在缺血預適應激活自噬中的作用.pdf

1、目的:我們的前期研究發(fā)現(xiàn)內質網(wǎng)應激誘導自噬介導了缺血預適應的神經(jīng)保護作用,本研究旨在探索在神經(jīng)細胞缺血預適應模型中,內質網(wǎng)分子伴侶GRP78與自噬激活之間的內在聯(lián)系。
　　方法:培養(yǎng)大鼠腎上腺髓質嗜鉻細胞瘤(pheochromocytoma cells,PC12 cells)細胞系和原代鼠皮層神經(jīng)元,建立缺血預適應(ischemic preconditioning,IPC)和缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivat

2、ion model,OGD)模型,預缺血前采用BAPTA(dibromo-1,2-bis(aminophenoxy)ethane N,N,N9,N9-tetraacetic acid,0.125-2μM)給藥抑制GRP78表達,用siRNA干擾PC12細胞GRP78的表達,并用慢病毒過表達GRP78蛋白建立GRP78穩(wěn)轉株。采用CCK8(Cell Counting Kit-8)法檢測細胞增殖力,免疫印跡和免疫熒光法檢測內質網(wǎng)應激分子伴侶

3、GRP78和自噬相關蛋白LC3、Beclin1、p-AMPK、p-mTOR以及p-p70S6K的變化,采用透射電鏡觀察自噬體的生成情況。
　　結果:IPC對PC12細胞和原代神經(jīng)元OGD具有保護作用,神經(jīng)細胞經(jīng)IPC處理12h后,GRP78、LC3和Beclin1上調,多層膜包裹的自噬體形成增加。用BAPTA抑制GRP78表達,能夠取消IPC對OGD的保護作用,并降低IPC引起的GRP78、LC3、Beclin1、p-AMPK、p

4、-mTOR的升高。GRP78siRNA亦能取消IPC對OGD的保護作用,并降低IPC引起的LC3、Beclin1升高。相反,過表達GRP78能夠提高PC12細胞對OGD的耐受性,并增加LC3、Beclin1和p-AMPK的表達,但降低p-mTOR、p-p70S6K1的表達,然而,應用GRP78siRNA處理過表達GRP78的穩(wěn)轉株,則完全取消了LC3、Beclin1、p-AMPK、p-mTOR和p-p70S6K1的變化。
　　結論