HMGB1通過調控內質網應激相關蛋白GRP78和CHOP的表達對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的：研究HMGB1對大鼠腦缺血再灌注后神經功能評分，梗死體積，病理學改變以及缺血半暗帶內質網應激（ERS）相關凋亡蛋白GRP78和CHOP表達的影響。
　　方法：成年健康SD雄性大鼠120只，隨機分成4組，分別為假手術組（Sham），大腦中動脈閉塞缺血再灌注損傷組（MCAO）模型組，甘草甜素干預組（GL組），丙酮酸乙酯干預組（EP組），其中24只于再灌注24h提取腦組織用于TTC染色檢測梗死體積，剩余的96只于再灌注6h、12h

2、、24h、48h提取腦組織，每個時間點每組6只。線栓法制備大鼠MCAO模型；GL組和EP組于再灌注后1h按照50mg/kg進行腹腔注射，此后每隔12h注射一次。假手術組及模型組注射同等量的生理鹽水，缺血1h再灌注，于相應時間點觀察大鼠的行為學表現(xiàn)，進行神經功能評分，然后斷頭取腦，石蠟切片HE染色觀察腦組織病理學改變，免疫組化法觀察缺血半暗帶HMGB1、GRP78和CHOP蛋白表達。剩余的24只于缺血1h，再灌注24h直接取腦，TTC染色

3、觀察各組大鼠腦梗死體積。所獲得數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件分析。
　　結果：⑴Sham組無神經系統(tǒng)損害癥狀，評分為0分；模型組于缺血1h，再灌注6h、12h、24h均有神經功能缺損癥狀，評分呈逐漸增加趨勢，48h評分稍有下降；GL組及EP組神經功能評分于各個時間點較模型組均有減輕(P<0.05)，兩干預組間對比差別不顯著(P>0.05)。⑵缺血1h再灌注后24h腦組織經過2％TTC染色后，未梗死腦組織染成紅色，梗死灶成白色。Sham組腦組織呈

4、紅色，顏色均勻，提示無梗死灶；模型組可見右側腦組織有不同面積的白色，提示腦組織局部梗死；GL組及EP組與模型組相比，白色區(qū)域范圍縮小，提示腦梗死體積明顯減小(P<0.05)，兩干預組之間無明顯差異（P>0.05）。⑶Sham組大鼠皮層組織結構未見明顯異常變化；模型組大鼠缺血半暗帶組織呈現(xiàn)大量壞死灶，神經細胞數(shù)量減少，胞核固縮，著色加深；而GL組及EP組在各個時間點與模型組相比，多數(shù)神經元形態(tài)改變較輕，胞體基本完整。⑷免疫組織化學染色結果

5、：再灌注48h缺血HMGB1蛋白表達：Sham組僅少量HMGB1表達于胞核，無明顯胞漿表達，模型組HMGB1陽性細胞數(shù)目增多且可見大量胞漿表達，與假手術組相比差異明顯(P<0.05)；GL組及EP組與模型組相比表達減少，特別是胞漿內表達明顯減少(P<0.05)；表明GL及EP干預明顯抑制了HMGB1的表達及由胞核向胞漿的轉位，而兩干預組對比無明顯差異；GRP78蛋白表達：GRP78是抗凋亡蛋白，各組都有一定數(shù)量的陽性表達；Sham組右側

6、大腦供血區(qū)GRP78陽性細胞很少量表達；模型組再灌注6h，即有GRP78陽性細胞表達增多，12h最多，24h后逐漸下降，表達量均顯著高于sham組(P<0.05)；GL組及EP組6h、12h、24h、48h, GRP78的表達顯著高于模型組(P<0.05)，兩干預組間對比差異不明顯；CHOP蛋白表達：CHOP是促凋亡蛋白，表達于胞核。Sham組缺血半暗帶未見明顯陽性表達；模型組于再灌注6h表達增加，24h達高峰，48h表達有所下調；GL

7、組及EP組各時間點模型組相比表達顯著降低(P<0.05)；兩干預組間比較差別不顯著(P>0.05)。
　　結論：①腦缺血再灌注誘導了內質網應激，上調內質網應激標志物GRP78和CHOP蛋白表達。②HMGB1抑制劑甘草甜素及丙酮酸乙酯干預抑制了腦缺血再灌注損傷后缺血半暗帶HMGB1的表達，上調GRP78、下調CHOP的表達，縮小腦梗死體積，減輕缺血側腦組織損傷程度，改善行為學表現(xiàn)，具有腦保護作用。③推測HMGB1在腦缺血再灌注損傷中