蛋白酶活化受體2在胰腺癌痛發(fā)生機制中的作用研究.pdf

1、目的： 癌性疼痛為癌癥患者最常見和最難忍受的癥狀之一,常比癌癥死亡更令人畏懼,嚴重影響生存質量,甚至導致患者拒絕治療或自殺。胰腺癌疼痛亦是如此。晚期胰腺癌痛相當劇烈,不僅因為軀體方面的疼痛,造成極其難忍的生理上的痛苦,而且常伴有強烈的植物神經系統和心理學異常,而帶來社會及精神方面的痛苦。因此,癌痛控制已成為患者的第一需要和構成胰腺癌姑息治療不可缺少的重要組成部分。對于胰腺癌痛理想的治療對策應是針對疼痛機制的治療,但其疼痛產生的機

2、制目前不是十分清楚。 而蛋白酶活化受體(Protease activated receptors,PARs)屬于G蛋白偶聯受體家族成員,目前發(fā)現的PARs家族成員共有4個,分別為PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4,其中PAR-2主要分布在氣道、表皮、胃腸道、胰腺、心血管以及神經系統,并參與多種生理及病理生理過程,胰蛋白酶是最有效的PAR-2激活劑。 目前研究提示,PAR-2可能在內臟疼痛特別是胰腺疼痛中起重要

3、的作用。許多研究證實,胸腰部的背根神經節(jié)傷害性神經元均表達PAR-2。鞘內置管給予亞炎癥濃度的胰蛋白酶可激活脊髓背角神經元傷害性感受傳遞,并呈劑量依賴性。給清醒大鼠胰管內注入胰蛋白酶或PAR-2特異性肽激動劑可引起疼痛行為反應。胰管內提前注入PAR-2特異性激活肽類似物可以消除大鼠對胰蛋白酶的反應。以上結果提示,激活的胰蛋白酶通過PAR-2引發(fā)疼痛可能是胰腺炎疼痛的重要機制之一。 但是,在胰腺癌癥患者發(fā)生的疼痛中PAR-2是否參

4、與,目前尚未有直接的文獻報道。而在胰腺癌的患者中,大部分出現胰蛋白酶增高的現象。因此,PAR-2在胰腺癌痛發(fā)生中的作用亟待證實。 方法： 本課題以人的胰腺癌組織作為實驗材料,結合生物化學、分子生物學、膜片鉗、原代神經細胞培養(yǎng)、動物行為學等實驗技術手段重點關注PAR-2在胰腺癌痛發(fā)生機制中的作用。進行了以下研究：(1)胰腺腫瘤標本的采集與病理學檢驗。(2)胰腺腫瘤組織蛋白水解酶釋放的鑒定與定量。(3)胰腺腫瘤組織釋放的蛋白

5、水解酶在體作用對大鼠熱痛與機械痛的影響及其機制。(4)胰腺腫瘤組織釋放的蛋白水解酶對培養(yǎng)的新生鼠背根神經節(jié)(Dorsal root ganglion,DRG)神經元膜電生理的影響及其機制。 結果： (1)胰腺腫瘤標本經病理學檢驗為胰頭腺癌,中度分化,患者術前有中上腹持續(xù)性鈍痛,黃疸,消瘦等臨床表現,視覺模擬評分(Visual analogue scale,VAS)>5分。 (2)胰腺腫瘤組織勻漿后胰蛋白酶的表達遠

6、遠高于正常胰腺組織對照組,將胰腺腫瘤組織小塊用HBSS培養(yǎng)液孵育后,其蛋白水解酶的釋放與對照組相比顯著增加。 (3)胰蛋白酶以及胰腺腫瘤組織孵育上清注入大鼠足底部,可引起大鼠明顯的熱痛覺過敏和機械性異常性疼痛。而腫瘤組織孵育上清加入廣譜的絲氨酸蛋白酶抑制劑FUT-175后再行足底注射,其引起的熱痛和機械痛明顯降低。而使用正常胰腺組織孵育上清做同樣處理,與生理鹽水的陰性對照組相比,沒有顯著差異。 (4)在培養(yǎng)的新生鼠DRG

7、神經元上,胰腺腫瘤組織孵育上清預處理可引起辣椒素敏感電流的增加。給予胰蛋白酶或PAR-2受體的激活肽SL-NH2同樣可引起辣椒素敏感電流的增加。而沒有蛋白水解酶活性的對照肽LR-NH2的預處理對此電流沒有明顯影響。而采用能夠拮抗PAR-2受體活性的合成肽FSLLRY-NH2預孵育DRG神經元,然后再觀察胰腺癌組織上清對辣椒素誘導電流的影響,發(fā)現FSLLRY-NH2能夠有效抑制胰腺癌組織上清的促進作用。 結論： 本結果表明

8、,此胰腺腫瘤組織標本的胰蛋白酶表達增加,蛋白水解酶活性增高,腫瘤組織孵育上清可在體激活傷害性感受神經元,引起軀體傷害性感受行為的發(fā)生,并且這種作用與蛋白酶的活性有關。在培養(yǎng)的DRG神經元上,胰腺腫瘤組織孵育上清預處理可引起瞬時受體電位(Transient receptor potential vanilloid-like,TRPV)電流的增加,而給予拮抗PAR-2受體活性的合成肽FSLLRY-NH2后可抑制這種促進作用,提示胰腺腫瘤組織