ATDC在大腸癌中的表達(dá)及其臨床意義和對腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、本文主要從ATDC蛋白在大腸癌中的表達(dá)及臨床意義、RNA干擾沉默ATDC表達(dá)對大腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響兩個方面進(jìn)行了論述。
　　第一部分ATDC蛋白在大腸癌中的表達(dá)及臨床意義
　　目的：通過對大腸癌臨床標(biāo)本中ATDC蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測,探討ATDC表達(dá)在大腸癌的發(fā)生發(fā)展中的作用,以及它和大腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　方法：使用免疫組織化學(xué)方法檢測大腸癌病人癌組織和正常切緣組織中的ATDC蛋白表達(dá)和定位,Wes

2、ternblot和RT-PCR定量ATDC蛋白的表達(dá)水平,分析ATDC蛋白和臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：ATDC蛋白在切緣正常組織和癌組織表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),癌組織中ATDC表達(dá)在性別、年齡、Dukes分期因素之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度因素間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：ATDC在大腸癌組織中高水平表達(dá),提示此基因與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程有關(guān)。因此為了更好的診斷和治療大腸癌有必要檢測和

3、抑制ATDC表達(dá)。大腸癌臨床病參數(shù)和ATDC表達(dá)情況相關(guān),表明檢測ATDC表達(dá)水平對于評估近期治療效果和遠(yuǎn)期預(yù)后有一定的臨床價值。
　　第二部分RNA干擾沉默ATDC表達(dá)對大腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響
　　目的：應(yīng)用針對人ATDC的特異性RNA干擾(RNAi)的方法,沉默大腸癌ATDC基因表達(dá),觀察其對人大腸癌細(xì)胞株生長的抑制作用。
　　方法：設(shè)計合成針對ATDC的siRNA,利用Lipofactamine2000試劑轉(zhuǎn)

4、染到人大腸癌細(xì)胞株sw620。應(yīng)用實時定量PCR(RT-PCR)檢測SW620細(xì)胞ATDC mRNA表達(dá)量和Western bolt檢測ATDC蛋白表達(dá)水平評估ATDC基因沉默效果,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡,Transwell侵襲實驗分析大腸癌細(xì)胞體外侵襲能力。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染siRNA組細(xì)胞較未轉(zhuǎn)染組比較,RNAi使得mRNA的表達(dá)下降40％同時使得ATDC蛋白在轉(zhuǎn)染組較非轉(zhuǎn)染組明顯下降。轉(zhuǎn)染后細(xì)胞主要停留在G0/G1期