化學(xué)去細(xì)胞異種神經(jīng)復(fù)合NGF、修復(fù)神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:用化學(xué)方法去除日本大耳白兔雙側(cè)脛神經(jīng)的雪旺氏細(xì)胞及髓鞘，制成去細(xì)胞神經(jīng)基膜管，將NGF(神經(jīng)生長(zhǎng)因子)與神經(jīng)基膜管復(fù)合，橋接成年wistar大鼠坐骨神經(jīng)10mm神經(jīng)缺損，進(jìn)一步探索NGF與異種去細(xì)胞神經(jīng)基膜管復(fù)合后用于異種移植修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的效果。方法:選用成年日本大耳白兔15只，切取兔雙側(cè)脛神經(jīng)各4cm，隨機(jī)抽取15例新鮮神經(jīng)，分別取其中2cm行流式細(xì)胞法檢測(cè)MHC-Ⅱ類組織相容性抗原，其余2cm行去細(xì)胞處理后再行流式細(xì)胞法檢

2、測(cè)MHC-Ⅱ類抗原及組織學(xué)、電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)，另15例新鮮神經(jīng)分別剪成1cm長(zhǎng)度，經(jīng)化學(xué)方法制成去細(xì)胞神經(jīng)基膜管，其中15段用4500U/ml的NGF溶液4℃浸泡24小時(shí)；另15段置于無(wú)菌PBS緩沖液中4℃保存?zhèn)溆茫桓鶕?jù)移植物的不同，將Wistar大鼠隨機(jī)分為3組，每組15只：實(shí)驗(yàn)組(A組)：去細(xì)胞異種神經(jīng)基膜管復(fù)合NGF移植組、對(duì)照組Ⅰ(B組)：去細(xì)胞異種神經(jīng)基膜管移植組、對(duì)照組Ⅱ(C組)：自體神經(jīng)移植組。分籠喂養(yǎng)，術(shù)后1個(gè)月行神經(jīng)

3、電生理檢測(cè)，包括脛后肌群運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位，再生神經(jīng)的傳導(dǎo)速度；用HE染色，免疫組化染色，透射電鏡等方法對(duì)移植段遠(yuǎn)端吻合口再生神經(jīng)纖維進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，并對(duì)再生有髓神經(jīng)纖維的數(shù)量、密度、直徑及雪旺氏細(xì)胞的密度進(jìn)行量化分析。結(jié)果:移植前新鮮神經(jīng)組MHC-Ⅱ類抗原檢測(cè)值為72.14±19.88，去細(xì)胞組MHC-Ⅱ類抗原檢測(cè)值為4.19±3.11，兩組比較存在顯著性差異(P＜0.05)，透射電鏡觀察顯示為膠原性管道，無(wú)細(xì)胞成分；術(shù)后1個(gè)月，3組動(dòng)物行

4、走均有不同程度的恢復(fù)，處死前行運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位檢測(cè)，A組的神經(jīng)傳導(dǎo)速度為21.16±2.31，B組的神經(jīng)傳導(dǎo)速度為13.37±1.89，C組為21.43±2.18，A組與C組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，A組與B組比較差異有顯著性(P＜0.05)，說(shuō)明神經(jīng)恢復(fù)效果優(yōu)于B組。組織學(xué)觀察見3組移植體遠(yuǎn)端吻合口橫切面再生神經(jīng)纖維呈微束狀，透射電鏡觀察再生神經(jīng)纖維具有正常的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。結(jié)論:經(jīng)化學(xué)萃取的去細(xì)胞兔脛神經(jīng)基膜管能夠移植于大鼠，成功修