牛分枝桿菌Mb1761c和Mb2277基因表達產(chǎn)物免疫原性及其在ELISA方法中的初步應(yīng)用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、牛結(jié)核病主要是由牛分枝桿菌(Mycobacterium bovis，MTB) 引起的一種人獸共患傳染病，它嚴(yán)重危害人的健康和畜牧業(yè)的發(fā)展，且導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟損失。因此，對牛結(jié)核病的防控顯得格外的重要。然而，缺乏可用于檢測結(jié)核桿菌的特應(yīng)性靶標(biāo)分子及用于研制有效疫苗的候選分子是結(jié)核病防治面臨的棘手問題，因此，發(fā)掘這些重要分子就成了結(jié)核病防治研究的熱點。分泌蛋白是目前研究較多的結(jié)核桿菌特異性抗原，本實驗篩選出Mb1761c和Mb2277兩個分泌

2、蛋白，在利用生物信息學(xué)方法對其信號肽和疏水跨膜區(qū)進行分析的基礎(chǔ)上，通過實驗生物學(xué)方法，對其表達免疫原性進行了驗證。本研究主要分為以下兩個方面的內(nèi)容： （1）牛分枝桿菌Mb1761c和Mb2277蛋白的免疫原性的初步研究。根據(jù)GenBank提供的Mb1761c和Mb2277的基因序列設(shè)計引物，通過PCR方法擴增出目的基因，構(gòu)建重組表達質(zhì)粒，原核誘導(dǎo)表達后，利用Western-Blot對表達產(chǎn)物的免疫原性進行驗證。結(jié)果表明目的蛋白具

3、有較強的免疫原性，從而為進一步研究其亞單位疫苗及ELISA檢測方法提供了候選蛋白。 （2）重組蛋白在ELISA檢測方法中的初步應(yīng)用研究。將篩選得到的兩個具有較強免疫原性的蛋白分子Mb1761c和Mb2277作為抗原，分別進行ELISA實驗。結(jié)果表明Mb2277的靈敏性較強。將兩個蛋白按照不同比例混合作為包被抗原，結(jié)果顯示將兩種重組蛋白按1：1混合包被，ELISA的靈敏度高于單個抗原包被的。 本研究篩選鑒定了分枝桿菌兩個具

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