Ion Torrent測(cè)序技術(shù)檢測(cè)Ⅰ型神經(jīng)纖維瘤病患者NF1基因突變.pdf

1、目的:應(yīng)用Ion Torrent個(gè)體化基因組測(cè)序儀(PGM)檢測(cè)Ⅰ型神經(jīng)纖維瘤病(NF1)患者NF1基因，探討Ion Torrent測(cè)序技術(shù)檢測(cè)NF1患者外周血DNA中NF1基因突變的可行性，評(píng)價(jià)相同位點(diǎn)Ion Torrent測(cè)序與Sanger測(cè)序結(jié)果的吻合性，了解Ⅰ型神經(jīng)纖維瘤患者NF1基因突變的類(lèi)型。
　　方法:收集2012年11月至2013年11月送檢至廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心分子遺傳室的14例臨床確診的Ⅰ型神經(jīng)纖維瘤病(NF1

2、)患者EDTA-Na2抗凝靜脈血。提取基因組DNA，首先兩管多重PCR擴(kuò)增患者NF1基因全部外顯子，多重PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后用Ion Torrent個(gè)體化基因測(cè)序儀(PGM)對(duì)患者NF1基因進(jìn)行測(cè)序，檢測(cè)到致病突變后，設(shè)計(jì)普通PCR引物并擴(kuò)增相應(yīng)外顯子，用Sanger測(cè)序法對(duì)患者NF1基因相應(yīng)的突變位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證，Ion Torrent PGM覆蓋不全的外顯子需普通PCR擴(kuò)增并用Sanger測(cè)序法重新檢測(cè)。
　　結(jié)果:在14例Ⅰ型神經(jīng)

3、纖維瘤病患者中，檢測(cè)到11例患者NF1基因致病突變，各突變均位于不同外顯子，無(wú)明顯突變熱點(diǎn)，其中2例無(wú)義突變，5例小插入或缺失突變，2例錯(cuò)義突變，2例剪接突變，1例患者突變位于5號(hào)外顯子覆蓋缺失區(qū)域，3例患者未檢測(cè)到致病突變。所有患者NF1基因Ion Torrent PGM覆蓋率均在97％以上，平均測(cè)序深度均在1500～2100×之間。Ion Torrent PGM檢測(cè)到的致病突變經(jīng)Sanger測(cè)序法驗(yàn)證結(jié)果一致。
　　結(jié)論:1、