PPARα激動劑非諾貝特對肺癌A549細胞生長和侵襲轉移的影響及其機制.pdf

1、目的：觀察過氧化物酶體增殖因子激活受體α(PPARα)激動劑非諾貝特對人肺癌A549細胞生長、侵襲轉移的影響，探討PPARα、基質金屬蛋白酶（MMPs）及其組織抑制劑（TIMPs）在非諾貝特抗腫瘤作用中的意義。
　　方法：體外培養(yǎng)人肺癌A549細胞，用不同濃度(0、12.5、25、50、75、100μmol/L)非諾貝特干預細胞后，四甲基偶氮唑藍比色(MTT)法檢測不同藥物濃度作用下肺癌A549細胞的生長抑制情況;流式細胞儀檢測細

2、胞凋亡率及細胞周期的分部情況;Hoechest染色法觀察A549細胞的形態(tài)學改變;細胞劃痕實驗觀察A549細胞遷移運動能力的影響;Transwell侵襲實驗檢測肺癌A549細胞侵襲能力的變化;提取A549細胞總RNA及蛋白，RT-PCR檢測細胞中PPARα、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表達情況，Wertern blot檢測細胞中MMP-2與MMP-9蛋白的表達水平;酶譜法檢測不同藥物濃度作用下細胞培養(yǎng)液

3、中MMP-2、MMP-9的酶活性。
　　結果：⑴細胞增殖抑制率:與對照組相比，非諾貝特組A549細胞增殖抑制率增大(P＜0.05)，且呈時間-劑量效應。⑵細胞凋亡檢測:與對照組比較，非諾貝特能夠誘導肺癌A549細胞凋亡，且高濃度組誘導凋亡作用更加明顯。⑶細胞周期的檢測:與對照組比較，非諾貝特組G0/G1期A549細胞數目減少，G2/M期的細胞數目增加，細胞阻滯于G2/M期，非諾貝特對A549細胞周期阻滯作用有時間-劑量關系。⑷Ho

4、echst33258染色觀察發(fā)現非諾貝特作用下肺癌A549細胞體積縮小，部分細胞膜被裂解，核固縮，呈致密濃染，高濃度(100μmol/L)組伴有凋亡小體出現。⑸細胞劃痕實驗顯示:作用48小時后，陰性對照組細胞劃痕基本愈合，隨著非諾貝特濃度的增加，劃痕寬度越大，各組細胞遷移率分別為:對照組:(88.21±0.09)％,12.5μmol/L組:(71.70±0.47)％,25μ mol/L組:(48.23±0.69)％,50μmol/L組:

5、(30.45±0.53)％,75μ mol/L組:(20.90±0.31)％,100μmol/L組:(16.20±0.29)％，(P＜0.05)。⑹Transwell侵襲實驗結果顯示:陰性對照組有大量細胞穿過基底膜，藥物組有不同數量的細胞穿越基底膜，各非諾貝特藥物組(100、75、50、25、12.5)的侵襲抑制率分別為:(65.78±0.58)％、(48.50±0.23)％、(40.35±0.19)％、(30.97±0.45)％、(2

6、3.10±0.62)％，(P＜0.05)。⑺RT-PCR結果顯示:與對照組相比，非諾貝特處理48小時后，隨著藥物濃度的增加A549細胞中PPARα、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表達增加，而MMP-2與MMP-9 mRNA的表達下降。⑻Wertern blot實驗顯示:用非諾貝特干預A549細胞48小時后細胞中MMP-2與MMP-9蛋白的表達水平均下降。⑼酶譜法檢測進一步證實:非諾貝特干預肺癌A549細胞，能夠抑制MMP-2與M