BRCA1相關基因單核苷酸多態(tài)性與三陰性乳腺癌易感性的研究.pdf

1、第一部分 BRCA1相關基因單核苷酸多態(tài)性與三陰性乳腺癌易感性的研究
　　目的：
　　乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，乳腺癌易感基因1(breast cancer type1 susceptibility protein，BRCA1)是乳腺癌中被廣泛深入研究的腫瘤易感基因之一。攜帶有突變型BRCA1基因的女性罹患乳腺癌的風險高于攜帶野生型BRCA1基因的婦女。分子流行病學的研究發(fā)現(xiàn)，BRCA1基因的突變與三陰性乳腺癌的發(fā)生

2、密切相關。BRCA1蛋白通過與蛋白復合體組成蛋白復合物發(fā)揮功能。本研究旨在研究BRCA1相關A蛋白復合物的相關基因的單核苷酸多態(tài)性與三陰性乳腺癌發(fā)病風險的關系，尋找和確定與漢族人群三陰性乳腺癌遺傳易感性相關的基因型和單體型。
　　方法：
　　本實驗以上海地區(qū)漢族女性人群為研究對象。選取414例在2008年至2011年間在復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院接受原發(fā)性乳腺癌手術的三陰性乳腺癌患者和354例健康婦女進行對照。收集她們的外周血基因

3、組DNA，應用Massarray技術檢測了病例組和對照組Abraxas，BRE，Rap80，BABAM1，BRCC36基因的37個SNP位點，隨后分析了不同基因型與三陰性乳腺癌發(fā)病的相關性。
　　結果：
　　三陰性乳腺癌患者Abraxas，BRE，Rap80，BRCC36基因的各檢測位點多態(tài)性分布與正常對照組沒有顯著差異。BABAM1的SNP位點rs7250266突變的G等位基因在三陰性乳腺癌患者中頻率顯著低于在正常女性中的

4、頻率(p＜0.01)?；蚍中惋@示，rs7250266位點的CC、GC、GG三種基因型在三陰性乳腺癌和對照組的分布頻率有顯著差異(P=0.03)，與攜帶CC基因型的個體比較，攜帶GC型的個體的三陰性乳腺癌的發(fā)病風險顯著降低(GC: OR=0.70，95％ CI(0.51-0.97)，GG:OR=0.4895％CI(0.21-1.07)）。對MAF超致過1％的SNP的單體型分析顯示:和主要單體型相比，單體型rs7250266(G)/rs2

5、278256(G)/rs144376330(C)/rs10403581(C)/rs3745185(G)攜帶者及單體型rs7250266(G)/rs2278256(G)/rs144376330(C)/rs10403581(A)/rs3745185(G)攜帶者的三陰性乳腺癌患病風險較低。
　　BABAM1基因的rs7250266的單核苷酸多態(tài)性與中國上海地區(qū)婦女的三陰性乳腺癌發(fā)病風險相關，其突變型等位基因攜帶者罹患三陰性乳腺癌的風險低

6、于野生型等位基因攜帶者。單體型分析也證實BABAM1基因的不同單體型間三陰性乳腺癌發(fā)病風險不同。
　　第二部分 BABAM1基因的胚系突變和體細胞突變檢測及rs8170對于BABAM1與BRCA1相關A蛋白復合物中其他基因相互作用的影響分析
　　目的：
　　第一部分研究發(fā)現(xiàn)BABAM1基因的單核苷酸多態(tài)性與三陰性乳腺癌易感性相關，我們進一步探索了中國人群中BABAM1基因的胚系突變情況，并檢測了腫瘤組織中BABAM1基

7、因的體細胞突變情況。我們同時探索了rs8170對于BABAM1蛋白與BRCA1相關A蛋白復合物其他蛋白(Abraxas，BRE、Rap80、BRCC36)間的相互作用的影響。
　　方法：
　　隨機抽取140例原發(fā)性乳腺癌患者的基因組DNA樣本和100例原發(fā)性乳腺癌腫瘤細胞DNA，進行BABAM1基因外顯子和外顯子內含子結合區(qū)域的PCR，測序檢測。對轉染了BABAM1基因表達和突變體質粒載體的細胞利用免疫共沉淀方法獲得的BRC

8、A1相關A蛋白復合物，并使用Western blot檢驗Rap80、BRE、BRCC36、Abraxas蛋白與BABAM1蛋白結合情況。
　　結果：
　　發(fā)現(xiàn)了兩個文獻沒有報道過的BABAM1基因組胚系突變，一個位于兩號外顯子，一個位于3'UTR。同時發(fā)現(xiàn)了一個腫瘤組織體細胞突變，位于七號外顯子。我們發(fā)現(xiàn)BABAM1缺失了羧基端的299-329aa的結構會導致其與Rap80、Abraxas、BRCC36、BRE的結合能力的降

9、低。而缺失了其他部位氨基酸的BABAM1與上述其他BRCA1相關蛋白的結合能力沒有顯著改變。rs8170恰巧位于第9號外顯子區(qū)域，功能預測發(fā)現(xiàn)其突變將干擾BABAM1的mRNA的剪切，從而使BABAM1蛋白丟失其羧基端的序列，從而影響B(tài)ABAM1蛋白與其他蛋白的結合。
　　結論：
　　BABAM1羧基端的299-329aa是與R印80、BRE、BRCC36、Abraxas這些蛋白結合的部位。其突變可導致BRCA1相關A蛋白復

10、合物的功能異常。
　　第三部分二十年內中國淋巴結陰性乳腺癌中腫瘤細胞增殖情況的改變及其與預后的關系
　　目的：
　　自1990年后，中國上海地區(qū)的乳腺癌的發(fā)病率迅速增長。國外已有研究表明:增殖情況是淋巴結陰性乳腺癌的重要預后因子。本研究探討的是:是否在這二十年間上海地區(qū)婦女的乳腺癌增殖情況和其他生化指標也出現(xiàn)了改變，該變化是否與乳腺癌的預后相關。
　　方法：
　　研究者連續(xù)選取了89例在1983～1986年

11、間在復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院接受手術且術后病理為淋巴結陰性、浸潤性乳腺癌的患者和105例連續(xù)的在2002～2003年間被診斷乳腺癌的患者。我們對這些患者的蠟塊進行調取，重新染色檢驗。這些患者的臨床、病理情況，雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、CK5/6、Ki67、磷酸化組蛋白3(PPH3)和人表皮生長因子受體2(HER2)表達情況和有絲分裂指數(shù)被觀察、記錄。
　　結果：
　　中位79個月的隨訪顯示，兩組的無復發(fā)生存率沒有差