神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后Nogo-A表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:
　　 圍產(chǎn)期窒息所致的新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemicencephalopathy，HIE)致死率及遺留后遺癥的幾率非常高，它嚴(yán)重的威脅了新生兒的生存質(zhì)量。主要原因是:中樞神經(jīng)受損后再生能力缺失，僅用對(duì)癥治療不能緩解其癥狀，亦不能降低其遺留后遺癥的可能性。舊觀點(diǎn)認(rèn)為中樞神經(jīng)受損后很難再生，而近期的研究表明:中樞神經(jīng)的內(nèi)環(huán)境中存在抑制神經(jīng)再生的因子，嚴(yán)重影響了中樞神經(jīng)的再生。根據(jù)目前國(guó)內(nèi)外研究，不難發(fā)

2、現(xiàn)其中比較常見(jiàn)的中樞神經(jīng)抑制因子有以下幾種:Nogo-A、髓磷脂相關(guān)糖蛋白(myelin-associatedglycoprotein，MAG)和少突膠質(zhì)細(xì)胞—髓磷脂糖蛋白(oligodendrocyte-myelinglycoprotein，OMgp)，Nogo-A的英文全稱是Neuriteoutgrowthinhibitor-A，它是一種被人類基因RTN4編碼的蛋白，被認(rèn)為是中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)突生長(zhǎng)的特異性抑制劑。這幾種抑制因子共同抑

3、制了神經(jīng)細(xì)胞的再生，它們經(jīng)過(guò)相同的受體(Nogoreceptor，NgR)發(fā)揮作用，而Nogo-A在抑制受損神經(jīng)中樞的作用更為強(qiáng)烈。
　　 該動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究旨在更為深入地探討新生兒缺氧缺血性腦病的治療。應(yīng)用免疫組化方法、HE染色檢測(cè)新生大鼠大腦Nogo-A陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量以及觀察新生大鼠腦組織的病理情況;給予新生大鼠神經(jīng)節(jié)甘脂(GM1)，嚴(yán)密觀察各個(gè)時(shí)間段、各組腦組織Nogo-A陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量及神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，探討Nogo-A在

4、新生大鼠HIBD腦損傷中的作用，觀察GM1對(duì)大鼠Nogo-A抑制腦細(xì)胞再生作用的影響及它是否可以保護(hù)因缺氧缺血而導(dǎo)致受損傷的神經(jīng)細(xì)胞。
　　 方法:
　　 將90只7日齡新生大鼠隨機(jī)分為三組:對(duì)照組、HIBD組及GM1治療組。①對(duì)照組(n=30):僅游離左側(cè)頸總動(dòng)脈，不結(jié)扎，不低氧，給予腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.25ml/kg。②HIBD組（生理鹽水組）(n=30):制備HIBD模型后即刻給予腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.25ml/

5、kg。視分組情況連用3天，③GM1治療組(n=30):制備HIBD模型后即刻給予腹腔內(nèi)注射GM-120mg/kg/天，稀釋至0.5ml后腹腔內(nèi)注射。視分組情況連用3天。以上各組均在12h、24h、72h三時(shí)間點(diǎn)采集標(biāo)本，每組10只。各組動(dòng)物分別處理后于12h、24h、72h時(shí)使其斷頭致死。將腦組織標(biāo)本浸泡在30％蔗糖、40g/L多聚甲醛溶液中，待3天后，用石蠟固定，切片，通過(guò)HE染色觀察各組新生大鼠腦組織病理情況;用免疫組化的方法觀察N

6、ogo-A陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量。
　　 結(jié)果:
　　 通過(guò)免疫組化的方法觀察對(duì)照組3個(gè)時(shí)段的新生大鼠腦組織Nogo-A陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均隨著日齡的增長(zhǎng)而略有增加;HIBD組:Nogo-A陽(yáng)性細(xì)胞在造模24時(shí)即明顯升高，至72小時(shí)仍呈略微升高的趨勢(shì);GM1組:Nogo-A的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)早期逐漸升高，至24h時(shí)數(shù)量最多，之后開(kāi)始減少，應(yīng)用GM1后，缺氧缺血后Nogo-A的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量的增加較為延后。通過(guò)HE染色觀察:①12h時(shí)間點(diǎn)觀察:神經(jīng)

7、細(xì)胞出現(xiàn)水腫，局部神經(jīng)元出現(xiàn)核仁消失、核固縮現(xiàn)象②24h時(shí)間點(diǎn)觀察:神經(jīng)元水腫，數(shù)量有所減少，核仁消失，核固縮;神經(jīng)基質(zhì)水腫。③72h時(shí)間點(diǎn)觀察:大腦皮質(zhì)神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，正常結(jié)構(gòu)消失，星形膠質(zhì)細(xì)胞腫脹，出現(xiàn)腦實(shí)質(zhì)壞死，膠質(zhì)細(xì)胞增生。
　　 結(jié)論:
　　 Nogo-A在缺氧缺血性腦損傷后其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著增高，抑制中樞神經(jīng)損傷后的再生，神經(jīng)節(jié)苷脂GM1在缺氧缺血性腦損傷后可部分抑制Nogo-A的表達(dá)，有穩(wěn)定細(xì)胞膜、減輕