CIDE-3對肝癌細胞SMMC-7721凋亡影響及其相互作用分子在酵母雙雜交系統(tǒng)中的篩選.pdf

1、原發(fā)性肝細胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）在全球是常見的惡性腫瘤之一，每年約有1000000的新發(fā)病例[1-3]。其發(fā)病率高、病死率高，嚴重威脅著人類生命健康。
　　研究背景：
　　在肝細胞中，有許多凋亡相關因子。有的因子與細胞膜上死亡受體相結合調節(jié)凋亡的外源性途徑，如Fas配體（FasL），腫瘤壞死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）等等；還有一些因子如轉化生長因

2、子-β（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）等并不結合死亡受體，而是通過影響內源性凋亡途徑來調節(jié)凋亡。凋亡的異常與HCC發(fā)生發(fā)展有關。
　　誘導細胞死亡的DFF45樣效應因子家族（celldeath-inducingDFF45-likeeffector，CIDE）家族即是近年來發(fā)現(xiàn)的新基因家族。迄今為止，CIDE家族在人類發(fā)現(xiàn)有3個成員：CIDE-A、CIDE-B和CIDE-3，在鼠中也有三種相應的存

3、在方式：Cide-a、Cide-b和鼠脂肪特異性基因（adipocyte-specificgene，F(xiàn)sp27）。CIDE家族在結構上包括與DFF（DNAfragmentationfactor，DAN片段化因子）高度同源的CIDE-N結構域，同時還具有CIDE家族保守的CIDE-C結構域，并以此發(fā)揮其家族的凋亡誘導功能。
　　已有研究表明CIDEs在細胞內可以影響細胞的凋亡和增生而對腫瘤的發(fā)生發(fā)展起作用。我們既往的實驗表明：CID

4、E-3的表達在HCC組織和癌周正常肝組織中存在差異，癌周正常組織內CIDE-3的表達高于HCC組織，而且CIDE-3的表達陽性率隨著HCC細胞分化的降低而減少。但關于HCC與CIDE-3的關系目前知之甚少。
　　研究目的：
　　探討CIDE-3對肝癌細胞凋亡功能的影響并篩選出在肝細胞中與之其相互作用分子，這對于完善HCC的病因學理論，篩選出新的HCC發(fā)生、發(fā)展相關的分子標記以及靶向藥開發(fā)都有著重大的意義。
　　研究方法

5、：
　　1、建立CIDE-3高表達的HCC細胞株來觀察細胞增殖和凋亡的變化；
　　2、以CIDE-3為誘餌蛋白，通過酵母雙雜交系統(tǒng)來篩選與之相互作用的因子。
　　研究結果：
　　1、成功構建了真核表達質粒pcDNA3.1-CIDE-3，通過脂質體法轉染入肝癌細胞SMMC-7721。過表達CIDE-3的細胞表現(xiàn)出凋亡增加，生長抑制；
　　2、通過酵母雙雜交系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)CIDE-3與肝細胞cDNA文庫中的26中基因

6、編碼的不同蛋白相互結合。通過體內、體外實驗驗證P53蛋白誘導基因7（p53proteininducinggene7，PIG7）基因也就是人脂多糖誘導的腫瘤壞死因子-α因子基因（Homosapienslipopolysaccharide-inducedTNF-αfactor,LITAF）與CIDE-3存在相互作用；它們通過CIDE-3的1～145aa與LITAF相結合；第三，LITAF與CIDE-3共轉染細胞后，會協(xié)同促進細胞的凋亡。