利用SELEX技術(shù)篩選高危型HPV L1蛋白適體的研究與探討.pdf

1、目的:人乳頭瘤病毒(HPV)感染是宮頸癌發(fā)生的必要前提。篩查HPV感染是宮頸癌早發(fā)現(xiàn)、早預(yù)防、早治療的關(guān)鍵。利用指數(shù)富集配體的系統(tǒng)進(jìn)化(SELEX)技術(shù),篩選出與高危型HPV(HR-HPV)L1蛋白高親和力、高特異性結(jié)合的適體,配合特異性IgY建立酶連接適體混合吸附體系(ELASA),用于快速檢測(cè)HR-HPV。
　　方法:運(yùn)用生物信息學(xué)分析方法對(duì)我國(guó)常見(jiàn)HR-HPV(16、18、58、52和31型)L1蛋白的B細(xì)胞抗原表位進(jìn)行綜合

2、分析,建立HR-HPV抗原表位肽譜;人工合成抗原表位肽,以此為靶標(biāo),利用SELEX技術(shù),從體外合成的全長(zhǎng)78nt(其中包含35nt的隨機(jī)序列)的寡核苷酸文庫(kù)中篩選出能特異性識(shí)別HR-HPVL1蛋白的DNA核酸適體,結(jié)合動(dòng)物免疫獲得的特異性IgY建立針對(duì)HR-HPV的ELASA體系;用經(jīng)臨床HC-2檢測(cè)確診的HR-HPV感染的宮頸分泌物檢驗(yàn)該體系檢出HR-HPV的特異性和靈敏度。
　　結(jié)果:人工合成的2個(gè)具有診斷潛能的B細(xì)胞抗原表位

3、肽,其純度大于99％。經(jīng)過(guò)多輪的SELEX篩選,得到18條適體鏈序列,序列的相似性為69.14%,適體的二級(jí)結(jié)構(gòu)以發(fā)卡、莖環(huán)為主。其中與多肽的結(jié)合能力最高的是3、7和12號(hào)適體,12號(hào)適體的Kd值可低至53.93nmol/L。經(jīng)動(dòng)物免疫獲得的IgY效價(jià)為1:12500~1:62500。適體結(jié)合IgY建立的ELASA體系有良好的特異性和靈敏度。
　　結(jié)論:本研究利用SELEX技術(shù)成功篩選到針對(duì)我國(guó)常見(jiàn)HR-HPVL1高親和力、高特異