SEN病毒檢測方法和致病性研究.pdf

1、【目的】建立SENV的聚合酶鏈反應(PCR)、斑點雜交和抗原抗體檢測方法,在此基礎(chǔ)上檢測SENV-D和SENV-H在武漢地區(qū)各種不同人群中的流行情況,結(jié)合臨床資料,進一步驗證SENV的傳播途徑,初步分析SENV的致病性及重疊感染時對拉米夫定抗HBV療效的影響,以探討SENV感染與病毒性肝炎之間的關(guān)系.【方法】針對SENV ORF1部分區(qū)域設(shè)計、合成引物,采用套式聚合酶鏈反應(nested-PCR)擴增SENV-D和SENV-H亞型.擴增

2、SENV-D ORF2基因,克隆至相應的質(zhì)粒中,以地高辛DNA標記試劑盒制備SENV ORF2探針,并進行斑點雜交檢測.比較針對SENV ORF2和ORF1不同區(qū)域設(shè)計引物的PCR方法和斑點雜交方法在SENV檢測方面的差異.對采用SENV ORF1引物、SENV ORF2引物擴增的陽性產(chǎn)物測序和Blastn序列比對,用clutal X和mega2軟件分析SENV的系統(tǒng)進化情況.轉(zhuǎn)化攜帶SENV ORF2基因的重組原核表達載體至BDPS菌

3、中,以IPTG誘導表達后進行SDS-PAGE,用混合血清對上述表達蛋白進行免疫印跡分析.【結(jié)論】SENV ORF1套式引物適用于對SENV感染率的PCR檢測,不同引物擴增和不同模板提取方法可能是影響SENV DNA檢出率重要因素;以地高辛標記的探針具有SENV-D特異性,斑點雜交檢測SENV感染陽性率低于PCR,而特異性較好;SENV ORF2原核表達蛋白具有一定的抗原活性,可用于SENV IgG的檢測.武漢地區(qū)存在SENV的感染,血漿