米非司酮對(duì)人卵巢顆粒細(xì)胞Bcl-2和Bax表達(dá)的影響.pdf

1、背景:孕酮是卵巢合成和分泌的主要激素之一，除了作為其它激素的底物，孕酮對(duì)于調(diào)節(jié)排卵和黃素化等生殖事件也是必需的。米非司酮是一種炔諾酮衍生物，與孕酮受體和糖皮質(zhì)激素受體有極強(qiáng)的親和力。作為抗孕酮藥物，米非司酮已被廣泛應(yīng)用于臨床終止早期妊娠。在調(diào)節(jié)生育方面，米非司酮還有其它可能的應(yīng)用，如抑制排卵、阻止植入和誘導(dǎo)出血。作為一種可能的避孕藥，米非司酮吸引了眾多研究者的注意。目前證實(shí)，卵泡期服用米非司酮能干擾卵泡生長(zhǎng)，抑制排卵，這使米非司酮有可能

2、成為一種不含雌激素的抑制排卵的口服避孕藥。但其抑制排卵的確切機(jī)制并不清楚。 顆粒細(xì)胞是成熟卵泡中最大的細(xì)胞群，其包圍且營(yíng)養(yǎng)著卵母細(xì)胞，支持卵母細(xì)胞成熟。另外，顆粒細(xì)胞分泌高水平甾體激素，以確保植入所必需的子宮內(nèi)膜感受態(tài)的形成及早期胚胎的發(fā)育。近來發(fā)現(xiàn)，卵巢顆粒細(xì)胞凋亡是卵泡閉鎖和黃體退化的主要原因。已證實(shí)所有脊椎動(dòng)物卵巢卵泡的閉鎖是通過顆粒細(xì)胞層的凋亡介導(dǎo)的。這些研究提示，米非司酮有可能通過誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞凋亡來抑制排卵。

3、有學(xué)者研究了米非司酮調(diào)節(jié)卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的可能途徑，發(fā)現(xiàn)米非司酮處理顆粒細(xì)胞24h后增加了顆粒細(xì)胞Caspase-3的活性。但目前為止，未見米非司酮對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響及其對(duì)凋亡相關(guān)基因Bcl-2基因家族表達(dá)的影響。本研究擬觀察低劑量米非司酮對(duì)體外培養(yǎng)的人卵巢黃素化顆粒細(xì)胞凋亡及其Bcl-2和Bax蛋白和基因水平表達(dá)的影響，探討米非司酮影響排卵的可能機(jī)理。 材料和方法:人卵巢顆粒細(xì)胞來自經(jīng)超聲引導(dǎo)下取卵的體外受精-胚胎移植(

4、IVF-ET)患者。顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)24小時(shí)貼壁后更換新鮮培養(yǎng)基，并分別加入終濃度為0(即無米非司酮作用—基礎(chǔ)狀態(tài)，為對(duì)照組)、2.5、5和10μM/L的米非司酮繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。采用電子顯微鏡和DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察不同濃度米非司酮對(duì)顆粒細(xì)胞的形態(tài)和生化特征的影響；運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察不同濃度米非司酮對(duì)顆粒細(xì)胞中Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的影響；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法測(cè)定不同濃度米非司酮處理后顆粒細(xì)胞Bcl-2和B

5、ax的mRNA的表達(dá)水平。 用One-wayANOVA和Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行處理組與對(duì)照組及兩兩組間數(shù)據(jù)比較分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，雙側(cè)。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理。 結(jié)果: 1.體外培養(yǎng)第一個(gè)24小時(shí)后，顆粒細(xì)胞貼壁，平鋪生長(zhǎng)，胞質(zhì)富含顆粒，細(xì)胞間出現(xiàn)纖維鏈接。 2.不同濃度米非司酮處理顆粒細(xì)胞24h后，透射電鏡觀察顯示，米非司酮能誘導(dǎo)

6、顆粒細(xì)胞出現(xiàn)染色質(zhì)邊集、胞質(zhì)濃縮及細(xì)胞體積縮小等細(xì)胞凋亡所特有的形態(tài)學(xué)改變。 3.不同濃度米非司酮處理顆粒細(xì)胞24h后，DNA瓊脂糖凝膠電泳發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，米非司酮各處理組均未出現(xiàn)明顯的“梯狀條帶”。 4.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，顆粒細(xì)胞中Bcl-2蛋白表達(dá)隨米非司酮處理劑量的增加而減少，處理組與對(duì)照組相比及處理組間Bcl-2蛋白表達(dá)差異具有顯著性；相反，Bax蛋白則隨著米非司酮?jiǎng)┝康募哟蟊磉_(dá)增多，且處理組與對(duì)照組相比

7、及處理組間Bax蛋白表達(dá)差異具有顯著性。 5.米非司酮處理組Bcl-2及Bax的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比均無顯著性差異，且各處理組間Bcl-2及Bax的mRNA表達(dá)水平也無顯著性差異。 結(jié)論: 1.米非司酮能誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人卵巢黃素化顆粒細(xì)胞發(fā)生凋亡，這可能是其通過抑制排卵發(fā)揮避孕功效的作用機(jī)制之一。 2.調(diào)節(jié)Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)可能是米非司酮誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞凋亡的途徑之一。 3.米非司酮