屎腸球菌發(fā)酵液對小鼠糞便微生物組成和免疫功能的影響以及人工瘤胃評價其對瘤胃發(fā)酵的影響.pdf

1、本論文通過給BALB/c小鼠灌胃屎腸球菌發(fā)酵液，研究其對小鼠糞便微生物組成、血常規(guī)、淋巴細(xì)胞亞群及免疫球蛋白含量的影響，并通過體外法培養(yǎng)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞，探討灌胃屎腸球菌發(fā)酵液對ConA刺激脾臟淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響。同時采用人工瘤胃裝置評價屎腸球菌發(fā)酵液對瘤胃發(fā)酵的影響。 試驗一通過測定屎腸球菌的膽汁、模擬胃液和小腸液的耐受性來評價其是否適合作為益生菌。同時選用40只BALB/c雌性小鼠，研究連續(xù)灌胃21天屎腸球菌發(fā)酵液對

2、小鼠糞便微生物組成的影響。結(jié)果表明，屎腸球菌具有較強(qiáng)的膽汁耐受能力，在膽汁中培養(yǎng)60 min時，與培養(yǎng)前對比活菌數(shù)顯著增加了。并且對模擬胃液和小腸液也有一定的耐受能力，在模擬胃液和小腸液中分別培養(yǎng)60 min和120 min后進(jìn)行活菌計數(shù)，仍能保證56.03％和92.16％以上存活。小鼠灌胃屎腸球菌發(fā)酵液后，糞便中腸內(nèi)菌的數(shù)量有顯著下降的趨勢，各個時間點腸內(nèi)菌的數(shù)值均極顯著低于(P<0.01)對照組的數(shù)值。在屎腸球菌發(fā)酵液灌胃7和14天

3、時，小鼠糞便中總好氧菌數(shù)值極顯著高于對照組的數(shù)值，21天時，兩組數(shù)值無顯著性差異。同時小鼠灌胃屎腸球菌發(fā)酵液能夠顯著增加糞便中乳酸菌的量。其中灌胃7天時，試驗組數(shù)值顯著高于對照組數(shù)值。當(dāng)灌胃14和21天時，小鼠糞便中乳酸菌的量極顯著高于對照組的數(shù)值。 試驗二研究屎腸球菌發(fā)酵液對小鼠外周血血常規(guī)、淋巴細(xì)胞亞群、血漿與小腸液中免疫球蛋白及脾臟淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子含量的影響。結(jié)果表明小鼠灌胃屎腸球菌發(fā)酵液后外周血中DP細(xì)胞所占比例和紅

4、細(xì)胞平均血紅蛋白濃度顯著增加，紅細(xì)胞平均體積顯著降低。但對外周血中75T細(xì)胞、NK細(xì)胞、Th細(xì)胞、Tc細(xì)胞和T細(xì)胞所占比例無顯著影響，外周血中白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對計數(shù)等血常規(guī)指標(biāo)也無顯著影響。灌胃屎腸球菌發(fā)酵液后小鼠血漿中l(wèi)gG含量顯著高于對照組，小腸液中l(wèi)gA含量有所升高，但差異不顯著；血漿中l(wèi)gM和lgA含量均無顯著影響。脾臟淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子數(shù)據(jù)顯示，在這個試驗期內(nèi)，持續(xù)灌胃屎腸球菌發(fā)酵液對IL-2的濃度無顯著影響，

5、IL-4的濃度隨著灌胃時間的增加而升高，在灌胃14天時達(dá)到最高峰，此時試驗組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-4的濃度顯著高于對照組的數(shù)值，隨后濃度逐漸降低。小鼠脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-6和IFN-γ濃度的變化趨勢在對照組與試驗組是一致的。對照組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中IL石和IFN-γ的濃度隨著試驗期的延長濃度不斷增加。同時試驗組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-6和IFN-γ的濃度隨著屎腸球菌灌胃時間的增加而升高，在灌胃14天時達(dá)到最高峰

6、，此時試驗組這兩種細(xì)胞因子的濃度均顯著高于對照組。隨后在灌胃21天時，這兩種細(xì)胞因子的濃度開始迅速下降，此時試驗組這兩種細(xì)胞因子的濃度顯著低于對照組. 試驗三利用持續(xù)動態(tài)人工瘤胃裝置，采用完全隨機(jī)試驗設(shè)計，以不添加屎腸球菌發(fā)酵液為對照，研究了添加1.25×106和6.25x106mL-1屎腸球菌發(fā)酵液對瘤胃液pH值、微生物蛋白(MCP)、氨態(tài)氮(NH3-N)、乙酸、丙酸、丁酸和總揮發(fā)性脂肪酸(TVFA)濃度的影響。結(jié)果表明添加屎