探索小劑量氯化鎘誘導孕鼠子癇前期樣表現(xiàn)的可能機制.pdf

1、研究背景： PE是人類妊娠特有的一種多系統(tǒng)性疾病，其在妊娠婦女中的發(fā)病率為3-5％，也是臨床上最常見的妊娠并發(fā)癥之一。PE典型的臨床表現(xiàn)包括妊娠20周以后首次出現(xiàn)的高血壓、蛋白尿及水腫等。PE嚴重危害母胎健康，是導致孕產(chǎn)婦及胎兒圍產(chǎn)期死亡的重要原因之一。過去幾十年，關(guān)于PE病因及病理生理機制的體內(nèi)外研究大量展開，但其確切的發(fā)病機制至今仍未清楚。因此，PE又被稱為一種“理論性疾病(disease of theories)”。隨著全球工業(yè)化

2、的快速發(fā)展，環(huán)境污染的急劇加重以及吸煙人群的大量增多，妊娠婦女暴露于鎘(cadmium，Cd)的幾率也隨之增加。作為一種有毒的重金屬，Cd又與人類許多疾病的發(fā)生有關(guān)，如高血壓、“痛痛病”、腫瘤等。另外，Cd與妊娠婦女PE的發(fā)生也有一定的關(guān)系，但其中具體的機制仍未明確。
　　目的：探討小劑量CdCl2誘導孕鼠PE樣病理表現(xiàn)的可能機制。
　　方法：(1)確定CdCl2誘導孕鼠PE樣病理表現(xiàn)的最佳劑量。將40只基礎(chǔ)收縮壓正常的孕鼠

3、隨機分為4組(n=10):大劑量妊娠組(1.0 Cd)、中劑量妊娠組(0.5 Cd)、小劑量妊娠組(0.25 Cd)和正常妊娠組（control）;妊娠第4-19天予孕鼠腹腔注射CdCl2溶液，前三組相應(yīng)的劑量分別為1.0、0.5、0.25 mg Cd/kg b.w./day，control組按2ml/kg b.w./day注射無菌生理鹽水。另將18只基礎(chǔ)收縮壓正常的未交配成年雌鼠隨機分為3組(n=6):大劑量未孕組(1.0 CdNP)

4、、中劑量未孕組(0.5 CdNP)及小劑量未孕組(0.25 Cd NP)，連續(xù)腹腔注射CdCl216天，相應(yīng)的劑量分別為1.0、0.5、0.25 mg Cd/kg b.w./day。觀察大鼠日常一般狀況，定期監(jiān)測各組大鼠收縮壓。妊娠第20天予孕鼠剖宮分娩，取標本。統(tǒng)計分析比較各組孕鼠體重增量、死亡率、收縮壓、尿蛋白量、胎盤及胎兒生長狀況等指標以確定最佳的造模劑量。(2)探討最佳劑量CdCl2誘導孕鼠PE樣病理表現(xiàn)的可能機制。HE染色觀察

5、孕鼠胎盤及腎臟組織形態(tài)學變化;免疫組化檢測APE1、8-OHdG、AT1R表達水平;實時熒光定量PCR法檢測APE1 mRNA、p53 mRNA、AT1R mRNA、miR-155的表達情況;蛋白免疫印跡法檢測APE1、p53、AT1R、GR、SOD1、TRX、Nrf-2的蛋白表達水平;FRAP法檢測總抗氧化能力;Griess試劑法檢測NOx的濃度。
　　結(jié)果：(1)正常妊娠組及中、小劑量未孕組的收縮壓在整個實驗過程中均無明顯變化

6、。大劑量給藥的大鼠大部分在CdCl2注射一周內(nèi)死亡。雖然中、小劑量妊娠組在CdCl2注射后收縮壓明顯升高、尿蛋白量增加，但與后者比較，前者日常狀況較差，孕期體重增量較少，母體死亡率較高，故選小劑量(0.25 mg Cd/kg b.w./day)為最佳造模劑量。(2)小劑量CdCl2導致孕鼠胎盤血管壁增厚、內(nèi)壁粗糙、管腔狹窄、大量炎細胞浸潤;并引起腎小球內(nèi)皮細胞增生，球囊間隙狹窄伴炎細胞浸潤。(3)小劑量CdCl2上調(diào)胎盤氧化/抗氧化標記

7、物—NOx、GR、SOD1、TRX、Nrf-2的水平，降低孕鼠血清及胎盤總抗氧化能力。(4)小劑量CdCl2促進胎盤DNA損傷/修復標記物8-OHdG、APE1、p53的表達。(5)小劑量CdCl2建立的PE模型組miR-155表達水平下調(diào)，而AT1R表達增加。
　　結(jié)論：給予妊娠大鼠腹腔注射小劑量CdCl2溶液可以構(gòu)建人類PE樣病理表現(xiàn)的動物模型。其可能的機制是，CdCl2誘導的DNA氧化損傷與修復通路的激活抑制miR-155的