hBMP-,2-基因轉(zhuǎn)染牙齦成纖維細(xì)胞對(duì)牙周組織再生影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該研究利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù),將hBMP<,2>基因轉(zhuǎn)染牙齦成纖維細(xì)胞,賦予其成骨細(xì)胞特性,探討其在牙周組織再生中的作用,為將其作為理想的種子細(xì)胞應(yīng)用于牙周組織工程提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).為此,該研究進(jìn)行了如下幾方面的實(shí)驗(yàn):①將含有pBK-hBMP<,2>噬菌粒表達(dá)載體的大腸桿菌擴(kuò)增后,以堿裂解法提取pBK-hBMP<,2>,并進(jìn)行提純和酶切鑒定.為以下實(shí)驗(yàn)做好準(zhǔn)備.②利用脂質(zhì)體將hBMP<,2>基因轉(zhuǎn)染至人牙齦成纖維細(xì)胞中,經(jīng)G418篩選后獲得了穩(wěn)定

2、表達(dá)hBMP<,2>基因的細(xì)胞克隆;在體外培養(yǎng)擴(kuò)增后,通過原位雜交、免疫組化、夾心ELISA以及轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)上清液對(duì)MC3T3—E1細(xì)胞堿性磷酸酶活性和骨鈣素合成的影響等檢測(cè),從mRNA及蛋白水平證實(shí)了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染hBMP<,2>基因的人牙齦成纖維細(xì)胞能夠表達(dá)具有一定生物學(xué)活性的hBMP<,2>.轉(zhuǎn)染細(xì)胞可持續(xù)表達(dá)有活性的hBMP<,2>蛋白達(dá)10代以上.③在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)穩(wěn)定表達(dá)hBMP<,2>的人牙齦成纖維細(xì)胞從形態(tài)、增殖特性和細(xì)

3、胞周期、堿性磷酸酶活性和骨鈣素合成以及體外形成礦化結(jié)節(jié)的能力等方面,對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了觀察.④將hBMP<,2>基因轉(zhuǎn)染的人牙齦成纖維細(xì)胞與藻酸鈣凝膠復(fù)合后,進(jìn)行體外培養(yǎng).利用HE染色技術(shù)、免疫組化方法和掃描電鏡觀察細(xì)胞在藻酸鈣凝膠中的生物學(xué)行為.⑤將hBMP<,2>基因轉(zhuǎn)染后的自體牙齦成纖維細(xì)胞作為種子細(xì)胞,與藻酸鈣凝膠復(fù)合,植入狗的人工牙周組織缺損區(qū).通過組織學(xué)觀察和組織學(xué)測(cè)量,評(píng)價(jià)基因轉(zhuǎn)染牙齦成纖維細(xì)胞對(duì)牙周組織再生的影響,并以