豫醫(yī)無毛小鼠無毛基因部分DNA序列分析及其原位PCR檢測.pdf

1、鄭州大學碩士學位論文豫醫(yī)無毛小鼠無毛基因部分DNA序列分析及其原位PCR檢測姓名：李敏申請學位級別：碩士專業(yè)：醫(yī)學免疫學指導教師：杜獻堂;趙國強20030410鄭州大學2 0 0 3 屆碩士研究生學位論文 豫醫(yī)無毛小鼠無毛基因部分D N A 序列分析及其原位P C R 檢測0 2 4 3 6 4 ) 及人( G e n b a n ka c c e s s i o nn u m b e rA F 0 3 9 1 9 6 ) 無毛基因的e

2、 D N A 序列進行比較和分析，研究它們的同源性程度，以確定豫醫(yī)無毛小鼠無毛基因的特異性所在；同時還對其無毛基因進行了原位P C R ( P C Ri n s i t u ) 熒光檢測，以進一步確切定位該基因。結果1 ．豫醫(yī)無毛小鼠和昆明小鼠無毛基因部分D N A 序列的克隆測序結果：測序結果均為一9 2 3 b p 的片段，二者完全相同，經與G e n b a n k 上公布的小鼠無毛基因e D N A ( Z 3 2 6 7 5

3、) 序列比較得知，本序列相當于該e D N A 序列的3 1 5 0 ～3 5 6 5 b p 位置，推測包含4 個外顯子( 部分1 3 外顯子、1 4 、1 5 外顯子、部分1 6 外顯子) 及3 個內含子( 第1 3 、1 4 、1 5 內含子) 。本研究首次報道了小鼠無毛基因的部分內含子序列，這3 個內含子序列，分別位于小鼠無毛基因( G e n b a n k a c c e s s i o nn u m b e r Z 3 2

4、 6 7 5 ) 的1 3 外顯子與1 4 外顯子之間( 即本實驗所測序列的5 4 ～3 3 6 b p ) ，1 4 外顯子與1 5 外顯子之間( 即本實驗所測序列的4 6 8 ～6 1 0 b p ) ，1 5 外顯子與1 6 外顯子之間( 即本實驗所測序列的7 3 1 ～8 1 l b p ) 。2 ．豫醫(yī)無毛小鼠無毛基因部分序列與昆明小鼠的比較：將二者測序結果做同源性分析，結果1 0 0 ，O ％同源。3 ．豫醫(yī)無毛小鼠無毛基因

5、部分序列與國外公布的小鼠、大鼠、人無毛基因的核苷酸同源性及氨基酸同源性分析：經生物學軟件分析，該序列的外顯子部分( 共4 1 6 b p ) 與小鼠( G e n b a n k a c c e s s i o nn u m b e rZ 3 2 6 7 5 ) 、大鼠( G e n b a n ka c c e s s i o nn u m b e rN M 0 2 4 3 6 4 ) 、人( O e n b a n ka c c e

6、 s s i o nn u m b e r A F 0 3 9 1 9 6 ) 的無毛基因核苷酸同源性分別為：1 0 0 ％、9 5 ％、8 4 ％。該序列可編碼1 3 8 個氨基酸，與國外發(fā)表的小鼠、大鼠、人無毛基因的氨基酸同源性分別為：1 0 0 ．o ％、9 7 ．8 9 6 、8 4 ．O ％。4 ．豫醫(yī)無毛小鼠無毛基因原位P C R 熒光檢測方法的建立運用原位P C R 技術方法對豫醫(yī)無毛小鼠中期染色體標本的無毛基因進行了熒光