自噬抑制劑ly294002對腺苷誘導肝癌細胞凋亡的作用及其機制.pdf

1、目的：
　　研究自噬反應在腺苷（Ado）誘導肝癌細胞凋亡中的作用及其機制。
　　方法：
　　肝癌HepG2及Hep3B細胞培養(yǎng)后按以下方法進行實驗:
　　1.單丹磺酰尸胺（MDC）染色檢測細胞內(nèi)的自噬小體，觀察Ado處理后自噬小體數(shù)量的變化。
　　2. Western blot測定Ado處理后微管相關蛋白1輕鏈3（LC3）水平的變化。
　　3. MTT法檢測細胞的生存率，觀察不同濃度自噬抑制劑ly29

2、4002處理后細胞生存率的變化。另外，檢測Ado與ly294002聯(lián)合用藥后是否增加了Ado的細胞毒性效果。
　　4. Hoechst33258染色觀察細胞核凋亡形態(tài)學改變。
　　5. RT-PCR法檢測Ado處理后細胞GRP78、PERK、Atg12基因表達變化；另外，檢測Ado與ly294002聯(lián)合用藥后Caspase-3、GRP78等基因表達變化。
　　結果：
　　1. MDC染色結果顯示：細胞毒藥物Ado

3、處理后細胞自噬小體數(shù)量增加;western blot結果顯示LC3-II/LC3-I比值明顯增加(p<0.05)。
　　2. MTT結果顯示：有效濃度的自噬抑制劑ly294002處理后細胞生存率明顯降低。2.0 mmol/L Ado與10μmol/L ly294002聯(lián)合用藥，結果表明聯(lián)合用藥較Ado單獨用藥細胞生長明顯受到抑制(p<0.05)，細胞凋亡率明顯上升(p<0.05)。
　　3. RT-PCR結果顯示，Ado處理

4、細胞后GRP78、PERK、Atg12的mRNA表達明顯上升（p<0.05）；另外，與單獨使用Ado相比，ly294002與Ado聯(lián)合用藥后GRP78的mRNA沒有顯著變化（p>0.05)，Caspase-3、Caspase-9、CHOP、細胞色素C的mRNA表達增加（p<0.05）。
　　結論：
　　1. Ado通過非折疊蛋白反應（UPR）PERK通路啟動肝癌HepG2及Hep3B細胞自噬反應，它是細胞促生存的響應信號。<