穿心蓮內(nèi)脂對人舌鱗狀細胞癌Tca8113細胞株增殖和抑制影響的實驗研究.pdf

1、研究的背景和目的:
　　目前舌鱗狀細胞癌在口腔癌中的發(fā)病率最高，不斷尋找新的安全有效的抗腫瘤藥物具有重要的意義，近年來中草藥中的抗腫瘤藥物成為了研究的熱點。穿心蓮(Andrographis paniculate Ness)是一種爵科植物，現(xiàn)已有許多國家在研究使用。研究發(fā)現(xiàn)穿心蓮中的穿心蓮內(nèi)酯（Andrographolide，AD）不但有抗炎、抗菌、抗病毒作用，還有較強的抗腫瘤作用。目前AD還未用于舌鱗癌的研究，做此研究有積極的現(xiàn)實

2、意義。本研究目的在于檢測AD對人舌鱗癌Tca8113細胞的增殖、細胞周期和BaxmRNA、Bcl-2mRNA表達的影響，從凋亡基因Bax、Bcl-2mRNA的表達情況來探討AD可能的作用機制，為AD可能成為臨床上治療舌鱗癌的新藥物提供了一定依據(jù)。
　　研究內(nèi)容和方法:
　　1.人舌鱗癌Tca8113細胞在常規(guī)條件下培養(yǎng)，取對數(shù)生長期的細胞用于實驗。
　　2.分別加入濃度為0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、4

3、0μg/ml、80μg/ml、160μg/ml的AD作用于Tca8113細胞，分別繼續(xù)培養(yǎng)24h和48h后，用MTT法檢測AD對細胞生長增殖的抑制作用。
　　3.分別加入濃度為0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用于Tca8113細胞，分別繼續(xù)培養(yǎng)24h和48h后，用流式細胞儀分析AD對細胞周期的影響。
　　4.分別加入濃度為0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用

4、于Tca8113細胞，繼續(xù)培養(yǎng)24h后，用RT-PCR法檢測AD對人舌鱗癌Tca8113細胞Bax、Bcl-2 mRNA表達的影響。
　　結(jié)果:
　　1.MTT結(jié)果顯示，AD作用Tca8113細胞后，能夠顯著地抑制細胞的增殖;分別加入濃度為0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml的AD作用Tca8113細胞24h后，細胞的抑制率分別為（0±0）％，（2.37±0.19）％

5、，(11.34±1.01)％，(36.65±1.99)％，（49.61±3.34)％，（72.11±5.01)％;AD作用Tca8113細胞48h后，細胞的抑制率分別為（0±0）％，（11.37±1.01）％，（27.43±1.93）％，(46.08±3.28)％，(65.59±6.33)％，(79.47±7.33)％。Tca8113細胞在AD作用相同的時間里，隨著實驗劑量范圍內(nèi)AD濃度的增加，細胞的抑制率逐漸升高(P＜0.05);而同

6、一AD濃度組的細胞被AD作用48h的抑制率比作用24h的抑制率高(P＜0.05)，具有明顯的劑量-時間依賴性。利用SPSS軟件計算出舌鱗癌細胞被AD作用24h后的IC50值為74.66μg/ml。
　　2.流式細胞術(shù)(FCM)結(jié)果顯示，濃度分別為0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用于Tca8113細胞24h后，細胞周期中的G0/G1期細胞比例分別為（39.45±0.56）％，（49.10±0.81）％，（56.6

7、1±0.64）％，S期細胞比例分別為（56.55±0.53）％，（46.57±0.60）％，（36.86±0.73）％。不同濃度的AD作用Tca8113細胞48h后，細胞周期中的G0/G1期細胞比例分別為（40.16±1.03）％，（57.34±0.65）％，（63.70±0.65）％，S期細胞比例分別為(58.31±0.75)％，（37.23±0.76）％，(32.28±0.54)％。Tca8113細胞在AD作用相同的時間內(nèi)，隨著AD

8、濃度的增加，G0/G1期細胞分布比例升高(P＜0.01)，S期的細胞降低(P＜0.01);細胞在相同濃度AD的作用下，隨著作用時間延長，G0/G1期的細胞分布比例升高(P＜0.01)，而S期的細胞分布比例降低(P≤0.01);對照組（0μg/ml）細胞在培養(yǎng)24h與48h后，舌鱗癌細胞周期的分布變化不大，(P＞0.05)。
　　3.RT-PCR檢測結(jié)果顯示，AD濃度分別為0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、

9、40μg/ml作用于Tca8113細胞24h后，BaxmRNA的表達量分別為0.383±0.013，0.513±0.021，0.631±0.036，0.733±0.042，0.916±0.048;Bcl-2mRNA的表達量分別為1.137±0.016，0.913±0.025，0.570±0.030，0.403±0.032，0.333±0.025。AD能夠促進細胞中BaxmRNA表達，抑制Bcl-2mRNA表達（P＜0.05），并具有劑量