短發(fā)夾RNA對人舌癌Tca8113細(xì)胞生長增殖的影響.pdf

1、為了探討通過RNA干擾（RNA interference，RNAi）抑制端粒酶活性途徑治療口腔腫瘤的可行性, 本課題選用人舌癌Tca 8113細(xì)胞為實驗對象。觀察靶向人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)的短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA ，shRNA）轉(zhuǎn)染人舌癌Tca 8113細(xì)胞后對細(xì)胞生長增殖的影響，RNA干擾前后細(xì)胞端粒酶活性及細(xì)胞形態(tài)的變化。

2、 在方法學(xué)上根據(jù)RNA干擾原理，利用構(gòu)建的表達(dá)shRNA的靶向hTERT mRNA的真核表達(dá)質(zhì)粒（shRNA1），非特異性的shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒（shRNA2），轉(zhuǎn)染試劑（德國 metafectene）和正常培養(yǎng)液處理細(xì)胞。24h后在共聚焦顯微鏡下檢測熒光表達(dá)情況； 24h、48h、72h用MTT法檢測細(xì)胞增殖活性； 48h后行HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)、TRAP PCR-ELISA檢測細(xì)胞端粒酶活性。 果顯示質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)

3、胞24h后,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組可見大量表達(dá)綠色熒光的細(xì)胞, shRNA1組出現(xiàn)大量懸浮的表達(dá)綠色熒光的圓形死亡細(xì)胞，貼壁細(xì)胞顯著減少；ELISA法顯示shRNA1組人舌癌Tca 8113細(xì)胞端粒酶活性顯著下降(P ﹤0.05)；HE染色發(fā)現(xiàn)shRNA1轉(zhuǎn)染后舌癌Tca 8113細(xì)胞胞體縮小、核固縮，同等培養(yǎng)條件下與其它組比較，細(xì)胞生長密度變稀，見許多圓形死亡細(xì)胞；而且shRNA1轉(zhuǎn)染后舌癌Tca 8113細(xì)胞的生長增殖受到明顯抑制（P ﹤0.0