PI3K-AKT信號通路在神經母細胞瘤細胞增殖和分化中的作用研究.pdf

1、第一部分 PI3K/AKT信號通路在神經母細胞瘤細胞增殖中的作用研究
　　 目的:探討P機制I3K/AKT信號通路在神經母細胞瘤細胞增殖中的作用。
　　 方法:體外培養(yǎng)人神經母細胞瘤SK-N-SH細胞，取對數生長期細胞，接種于96孔板，接種濃度(1-5)×105/ml，每孔100ul。接種24小時后，給予LY294002處理細胞，作用24h、48h;更換無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12h后用IGF-1處理細胞，作用12h、24h

2、; MTT法測每組細胞OD值，計算細胞存活率。
　　 結果:24h、48h后LY294002組細胞存活率小于對照組，且細胞存活率隨藥物濃度及作用時間的增加而降低，差異有統計學意義，對照組各濃度之間差異無統計學意義;12h、24h后IGF-1組與對照組相比，細胞存活率增加，差異有統計學意義。
　　 結論:PI3K/AKT信號通路與神經母細胞瘤細胞的增殖過程密切相關，抑制PI3K/AKT信號通路可顯著阻礙神經母細胞瘤細胞增殖

3、，而PI3K/AKT信號通路激動劑可促進神經母細胞瘤增殖。
　　 第二部分 PI3K/AKT信號通路在神經母細胞瘤細胞分化中的作用研究
　　 目的:探討PI3K/AKT信號通路在神經母細胞瘤細胞分化中的作用。
　　 方法:體外培養(yǎng)人神經母細胞瘤SK-N-SH細胞，取對數生長期細胞，接種于6孔板，接種濃度(1-5)×106/ml，每孔2ml。接種24小時后，給予LY294002處理細胞;IGF-1各組先更換無血清的

4、培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞12h后，再用IGF-1處理細胞;LY294002作用48h后，IGF-1作用12h后，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)有無分化改變，熒光定量PCR(FQ-PCR)法檢測TrkA基因mRNA的表達水平。
　　 結果:形態(tài)學觀察，LY294002組和IGF-1組均未出現明顯的分化形態(tài)學改變。FQ-PCR顯示LY294002組細胞TrkA表達水平較DMSO對照組、空白對照組降低，差異有統計學意義;IGF-1組TrkA表達水平較