慶大霉素對小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷機制研究.pdf

1、[目的]探討慶大霉素對小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(spiralganglioncell，SGC)的損傷機制。 [方法]取出生后2～6天昆明種乳小鼠耳蝸，利用酶消化和機械分離相結(jié)合的方法分離出SGC，并進行體外培養(yǎng)。將培養(yǎng)4天的SGC用4％多聚甲醛室溫固定30min，以小鼠源神經(jīng)纖維細(xì)絲蛋白(Neurofilament-68/200Kda，NF-L+H)單克隆抗體作為一抗，按照SP法對所培養(yǎng)細(xì)胞進行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，對SGC作出鑒定。

2、將培養(yǎng)第4天的細(xì)胞分為4組：空白對照組及3種濃度的慶大霉素干預(yù)組(慶大霉素終濃度分別為50mg/L、100mg/L、150mg/L)，作用48h后對各組細(xì)胞進行透射電鏡觀察以及凋亡效應(yīng)蛋白Caspase-3免疫細(xì)胞化學(xué)染色，染色結(jié)果用圖像分析系統(tǒng)及SPSS統(tǒng)計學(xué)軟件進行定量分析。 [結(jié)果]SGC原代培養(yǎng)獲得成功，一般有相對生長的兩個突起，為典型的雙極神經(jīng)元，經(jīng)NF-L+H抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色，其胞質(zhì)及突起均呈陽性反應(yīng)，染成棕黃色

3、。在透射電鏡下觀察SGC超微結(jié)構(gòu)，3種濃度的慶大霉素組SGC與空白對照組相比，均出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變，以細(xì)胞核和線粒體為著，這種改變與凋亡相關(guān)。慶大霉素組SGC出現(xiàn)明顯的凋亡效應(yīng)蛋白Caspase-3陽性反應(yīng)，與空白對照組相比，有顯著性差異，且隨著慶大霉素濃度的增高，Caspase-3陽性反應(yīng)程度也升高。 [結(jié)論]慶大霉素對小鼠耳蝸SGC有直接毒性作用，可導(dǎo)致SGC凋亡，線粒體損傷在這一過程中可能具有重要意義。Caspase-3