骨折大鼠血清對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：①觀察大鼠骨折后不同時(shí)間點(diǎn)外周血間充質(zhì)干細(xì)胞（PBMSCs）的數(shù)量變化，并與同期培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)比較異同。②觀察大鼠骨折后外周血對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）趨化和成骨的影響，并分析可能原因及其相關(guān)基因的變化。③觀察BMP-2 對(duì)大鼠BMSCs 遷移、趨化的影響，并研究此過(guò)程中的信號(hào)通路。
　　 方法：⑴建立大鼠骨折模型，根據(jù)骨折后1、3、7d 時(shí)間點(diǎn)分組，抽取外周血，獲得單核細(xì)胞，貼壁分離培養(yǎng)MSCs，檢

2、測(cè)各組成纖維細(xì)胞集落形成單位（CFU-Fs）數(shù)和集落形成率（CFE），同期分離培養(yǎng)BMSCs。⑵MTT 法檢測(cè)不同來(lái)源的MSCs 增殖特點(diǎn)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSCs 表面抗原表達(dá)，成骨和成脂分化檢測(cè)其多項(xiàng)分化潛能。⑶分離各組外周血血清，Transwell 裝置觀察血清對(duì)BMSCs 遷移的作用，RT-PCR 法研究骨折組血清對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞ALP、OC 和OPNmRNA 表達(dá)的影響，ELISA 法檢測(cè)各組血清中BMP-2 和SDF-1 的含量

3、。⑷BMP-2 預(yù)刺激間充質(zhì)干細(xì)胞，Western blot、ELISA 檢測(cè)CXCR4 的表達(dá)及SDF-1 的分泌。⑸添加LY294002、LHMO、AMD3100 阻斷MSCs 信號(hào)通路后，Transwell裝置檢測(cè)BMP-2 對(duì)MSCs 趨化的作用。
　　 結(jié)果：①骨折后PBMSCs 含量升高，且具有間質(zhì)干細(xì)胞的特性，表達(dá)抗原CD44、CD90、CD29，不表達(dá)造血細(xì)胞系標(biāo)志CD34、CD45，能夠向成骨、成脂分化。②骨折

4、血清顯著促進(jìn)MSCs 遷移和成骨分化，骨折組血清BMP-2 含量較對(duì)照組有顯著差異，且具有時(shí)序性。③BMP-2 處理的間充質(zhì)干細(xì)胞SDF-1 分泌增加，CXCR4 表達(dá)升高，阻斷劑LHMO、AMD3100 可以明顯降低MSCs 的遷移能力，LY294002 無(wú)此作用。
　　 結(jié)論：⑴骨折后大鼠PBMSCs 動(dòng)員增加，并呈時(shí)序性變化。該細(xì)胞具有間質(zhì)干細(xì)胞的特性。⑵骨折后大鼠外周血含有多種因子，在促進(jìn)MSCs 趨化和分化中發(fā)揮重要作