骨髓間充質(zhì)干細胞移植對大鼠急性心肌梗死后心肌細胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　 急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是心血管疾病的中的一個重要的致死性疾病，目前臨床上的治療方法主要有藥物溶栓、植入支架、冠狀動脈旁路移植術、心臟移植術等。但這些治療方法僅能防止心梗范圍的擴大，而不能使已壞死的心肌細胞逆轉(zhuǎn)，因此尋求更加有效的治療辦法，是國內(nèi)外學者共同的期望和任務。近十幾年來，隨著對具有多向分化潛能的干細胞的不斷研究，使之在細胞移植方面具有良好前景。骨髓間充

2、質(zhì)干細胞(bone mesenchymalstem cells，BMSCs)具有取材方便、容易分離、低免疫源性等優(yōu)點。已有實驗證明骨髓間充質(zhì)干細胞，可以作為心肌梗死疾病的細胞移植，可以促進損傷區(qū)血管的再生，并能減少心肌細胞的凋亡，而具體凋亡機制尚待進一步研究。
　　 本研究旨在觀察骨髓間充質(zhì)干細胞移植對大鼠急性心肌梗死后心肌細胞凋亡因子Bcl-2（B cell Leukemia，B細胞淋巴瘤/白血病-2）蛋白和PDCD5（pro

3、grammed cell death5，程序化死亡分子5）蛋白及基因(PDCD5mRNA)表達的影響。
　　 方法:
　　 1、分組：健康SD雄性大鼠45只，隨機分為3組：對照組、AMI組和BMSCs組，每組15只。對AMI組和BMSCs組采用結(jié)扎左冠狀動脈前降支的方法建立心肌梗死模型，而對照組只打開胸腔，不結(jié)扎左冠狀動脈前降支。
　　 2、骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)：以乳鼠股骨骨髓為干細胞來源，采用貼壁法體外培養(yǎng)骨

4、髓間充質(zhì)干細胞，5-溴脫氧尿核苷(BrdU)標記備用。
　　 3、移植方法：冠脈結(jié)扎后30min，將BrdU標記的BMSCs100uL在BMSCs組缺血周邊區(qū)域心外膜下4個不同部位注射，AMI組和對照組注射相同劑量的生理鹽水。
　　 4、檢測指標：骨髓間充質(zhì)干細胞移植4周時處死大鼠，采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的TUNEL法檢測心肌細胞凋亡指數(shù)，采用免疫組織化學方法檢測BrdU陽性干細胞及心肌Bcl-2、PDCD5蛋白表

5、達情況，采用PCR技術檢測PDCD5mRNA的表達。
　　 結(jié)果:
　　 骨髓間充質(zhì)干細胞移植4周時，BMSCs組在發(fā)生凝固性壞死的心肌內(nèi)可以看到局灶BrdU標記陽性的骨髓間充質(zhì)干細胞。對于非梗死區(qū)心肌組織中PDCD5蛋白和mRNA表達及心肌細胞凋亡指數(shù)，BMSCs組低于AMI組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。對于非梗死區(qū)心肌組織中Bcl-2蛋白，AMI組低于BMSCs組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。