腹瀉型腸易激綜合征患者結腸異常表達蛋白質的篩選及鑒定.pdf

1、背景與目的：腸易激綜合征(irritablebowelsyndrome，IBS)是常見的功能性腸病，其發(fā)病機制尚不清楚。已提出的有胃腸動力異常機制，內臟敏感性改變機制，腦腸相互作用機制，腸道內分泌細胞異常機制等等，但是所有的這些機制均不能解釋IBS的全部表現(xiàn)。本研究著眼于一切生命活動的直接執(zhí)行體—蛋白質的改變，旨在從蛋白質水平發(fā)現(xiàn)腹瀉型IBS(D-IBS)患者結腸發(fā)生的異常改變，揭示IBS出現(xiàn)各種臨床癥狀的可能原因。 材料與方法

2、：D-IBS患者4例，診斷均符合功能性胃腸病羅馬Ⅱ診斷標準，男女各半作為實驗組，健康志愿者4例作為對照組。分別在進行結腸鏡檢查時，直視下于回肓部及乙狀結腸處活檢3塊，立即置于含0.1％苯甲基磺酰氟(PMSF)的冰鹽水中洗凈，液氮中保存。(離體后10分鐘內完成)。提取標本蛋白后，按照G(o)rgA的方法進行雙向凝膠電泳。一向等電聚焦，按照等電點的不同將蛋白提取液在水平方向進行一維分離，二向十二烷基磺酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAG

3、E)對蛋白提取液按照分子量不同在垂直于等電聚焦方向上進行第二維分離。采用考馬斯亮藍染色法對于凝膠進行顯色固定，掃描儀獲取圖像。使用ImageMaster2DElite軟件對圖像進行分析配比，篩選出在D-IBS組表達有明顯差異的蛋白質點；選取差異最明顯而且與其它蛋白點易于分離的點進行質譜鑒定，鑒定出的蛋白在專業(yè)網(wǎng)站檢索其功能。 結果：利用雙向電泳技術成功得到人結腸粘膜組織的蛋白質組圖譜，正常對照組2-DE圖譜得到平均蛋白點336個

4、，組間圖像平均匹配率91.83％，D-IBS組2-DE圖譜得到平均蛋白點426個，組間圖像平均匹配率94.60％。D-IBS組與正常對照組之間平均膠進行比較，兩組間匹配率為74％，發(fā)現(xiàn)Volume值改變≥2.0倍以上的點共24個，其中21個點表達上調，3個點表達下調。分別選擇其中表達上調及下調最明顯的2個點，共4個進行質譜鑒定，表達上調的蛋白經(jīng)鑒定為免疫球蛋白J鏈(ImmunoglobulinJchain)和熱休克蛋白27(heatsh

5、ockprotein27)，表達下調的蛋白點為血紅蛋白β亞基(Hemoglobinbetasubunit)和果糖二磷酸醛縮酶A(Fructose-bisphosphatealdolaseA)。 結論：用雙向電泳的方法可以得到人結腸蛋白質組的表達圖譜；D-IBS患者出現(xiàn)的臨床癥狀可能與結腸一些蛋白表達水平的上調或下調有關，這些蛋白包括免疫球蛋白J鏈(ImmunoglobulinJchain)，熱休克蛋白27(heatshockpr