TSP2-8CUB1+2片段影響ADAMTS-13分泌方向的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：研究TSP2-8CUB1+2片段是否決定血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)合成后細胞內運輸?shù)姆较颍私饨饘俚鞍酌窤DAMTS13羧基端結構與功能的關系，為臨床了解和治療血栓性血小板減少性紫癜疾病提供理論依據。
　　 方法：采用聚合酶鏈式反應及DNA重組技術構建pcDNA3.1-ADAMTS13及pcDNA3.1-delTSP2-8CUB1+2ADAMTS13重組質粒；用脂質體轉染技術將重組質粒分別轉染犬腎上皮極性細

2、胞MDCK，篩選出陽性細胞克隆后傳代鋪到中間有特殊分子篩膜的雙池培養(yǎng)皿內培養(yǎng)，細胞生長到無空隙后收集上、下池培養(yǎng)液；通過Western Blot檢測上、下池培養(yǎng)液中ADAMTS13蛋白表達水平，以對比分析ADAMTS13蛋白在極性細胞內的分泌方向。
　　 結果：
　　 1.經PCR擴增、酶切電泳分析和DNA測序證實，本實驗構建的重組質粒目的基因片段為人delTSP2-8CUB1+2ADAMTS13-cDNA。
　

3、　 2.穩(wěn)定表達野生型ADAMTS13的MDCK細胞培養(yǎng)于特殊分子篩膜上后，通過Western Blot僅在膜的上池培養(yǎng)液中檢測到ADAMTS13蛋白。
　　 3.穩(wěn)定表達缺失TSP2-8CUB1+2區(qū)域ADAMTS13的MDCK細胞培養(yǎng)于特殊分子篩膜上后，利用Western Blot在膜的上、下池培養(yǎng)液中均檢測到ADAMTS13重組蛋白。
　　 結論：
　　 1.金屬蛋白酶ADAMTS13的分泌是有極性

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