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文檔簡介
1、磷脂酶D(PLD)是植物組織中普遍存在的一種酶。PLD及其產物PA在信號傳導、膜脂降解中起重要作用，與植物脅迫密切相關。黃瓜作為主要的蔬菜，在種植過程中經常遇到鹽害、干旱等逆境脅迫。本試驗以‘新泰密刺’黃瓜為試材，用RT-PCR結合RACE法從黃瓜幼葉中克隆了PLD基因的全長序列，并構建其正反義表達載體，分別用農桿菌介導法和子房注射法進行了煙草和黃瓜的轉基因研究，并利用RealTime-PCR法對NO3-脅迫下黃瓜PLD基因的表達進行了
2、定量分析。主要結果如下： 1.利用RT-PCR結合RACE技術獲得了黃瓜磷脂酶D基因，命名為cuPLDα，GenBank注冊號為EF363796。 2.序列分析表明，cuPLDα cDNA全長2,756 bp，編碼區(qū)2,427 bp，編碼808個氨基酸，預測蛋白質分子量約為91.8 kD，等電點為5.37。黃瓜磷脂酶Dα存在C2結構域、IYIENQFF結構域和HKD結構域。黃瓜磷脂酶Dα屬于磷脂酶Dα家族，不存在有意義跨
3、膜螺旋結構。 3.提出一個新的解決基因克隆中基因突變的方法：通過拼接兩個或以上陽性克隆的非突變區(qū)域，構建無突變全長cDNA。 4.利用RealTime-PCR法分析發(fā)現(xiàn)，經不同濃度NO3-處理0.5 h后，cuPLDα表達隨NO3-濃度增加而增強。182 mmol/L的NO3-處理cuPLDα表達最強，為對照的4.66倍。 5.為研究黃瓜磷脂酶Dα的功能，構建其正義表達載體pBI121-cuPLD和反義表達載體p
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