姜黃素對腎小管上皮細胞轉分化的干預作用以及與PPARγ有關的信號通路的研究.pdf

1、[目的]腎小管間質纖維化（Tubulointestitial fibrosis，TIF）是各種不同慢性腎病進行性發(fā)展的共同通路，目前尚無特效治療。目前公認的引起TIF的主要機制之一是腎小管上皮細胞轉分化（Epithelial mesenchymal transition，EMT）。姜黃素是中藥姜黃中的主要活性成份，具有抗纖維化的能力，但其抗TIF的作用尚待深入研究，目前關于姜黃素發(fā)揮作用的機制僅初步研究了經典的TGF-β/Smads通路

2、，其它機制研究較少。MAPK通路是非Smad通路中重要的通路，其中ERK1/2通路在EMT中發(fā)揮著重要的作用，但其具體機制尚未清楚。另外有報道姜黃素可以激動PPARγ受體，而PPARγ激動劑如吡格列酮具有抑制纖維化的作用。因此我們假設姜黃素通過與PPARγ相關信號轉導途徑抗TIF。并探索姜黃素抑制HK-2細胞發(fā)生EMT與ERK1/2通路和PPARγ通路有關的機理。
　　[方法]整體實驗我們采用結扎C57BL小鼠右側輸尿管建立UUO

3、模型，將小鼠隨機分為假手術組、模型組、不同劑量姜黃素組和姜黃素+PPARγ抑制劑組。術后第10天和14天通過HE染色和Masson染色觀察腎臟病理情況。體外實驗采用TGF-β1刺激HK-2細胞，使其發(fā)生EMT，采用western blot和免疫熒光檢測α-SMA驗證模型是否成功;姜黃素干預細胞36小時后采用western blot檢測α-SMA、E-cadherin和PAI-1確定姜黃素對EMT的作用;western blot檢測姜黃素

4、對TGF-βⅡ型受體(TRβⅡ)、TGF-βⅠ型受體TRβⅠ、p-Smad2、p-Smad3、ERK1/2和p-PPARγ的作用，免疫熒光檢測姜黃素對PPARγ核轉移的影響，探索姜黃素發(fā)揮抑制EMT的可能機制。另一方面，通過加入ERK1/2抑制劑U0126，PPARγ抑制劑BADGE以及shRNA沉默PPARγ的表達進一步確定姜黃素發(fā)揮作用的機制。
　　[結果]姜黃素可以改善UUO模型小鼠腎小管間質纖維化程度，加入了PPARγ抑制

5、劑后，姜黃素發(fā)揮上述作用的效果降低。2.5ng/ml的TGF-β1可以誘導HK-2細胞發(fā)生EMT;姜黃素可以抑制TGF-β1誘導的α-SMA和PAI-1的表達，增加E-cadherin的表達;姜黃素可以抑制TRβⅡ、TRβⅠ、ERK1/2和p-PPARγ的表達，促進PPARγ核轉移;U0126抑制ERK1/2，BADGE可以減弱姜黃素發(fā)揮上述作用，shRNA抑制PPARγ的表達可以減弱姜黃素發(fā)揮抑制PAI-1和TRβⅠ的作用。U0126